本文關(guān)鍵詞：甜瓜乙烯應答因子基因CmERFI-5、CmERFI-13、CmERFI-15在果實發(fā)育過程中的功能分析

  更多相關(guān)文章： 甜瓜 ERF 轉(zhuǎn)錄因子 瞬時表達

【摘要】：本文以甜瓜品種河套蜜瓜為材料,研究了甜瓜乙烯應答因子(Ethylene response factor, ERF)基因CmERFI-5、CmERFI-13、 CmERFI-15在果實中的功能。ERF基因位于乙烯信號轉(zhuǎn)導途徑的下游,通過結(jié)合GCC-box調(diào)控下游靶基因的表達,從而起到調(diào)控果實發(fā)育的功能。采用RT-PCR技術(shù)從甜瓜中克隆到了CmERFI-5、 CmERFI-13(?)CmERFI-15基因的cDNA。所克隆的全長cDNA分別為934 bp、879 bp和769 bp,其ORF分別為732 bp、834 bp、636 bp,編碼243、277、211個氨基酸。分別構(gòu)建其超表達載體和RNAi載體,通過農(nóng)桿菌介導的瞬時表達技術(shù)將目的基因的超表達及RNAi載體注射到綠熟期甜瓜果實中,并對注射部位進行觀察。CmERFI-5基因的超表達和RNAi干擾載體使注射部位均出現(xiàn)了保持綠色(延遲成熟)的表型。CmERFI-13基因的超表達載體注射部位提前變黃,而RNAi干擾質(zhì)粒使注射部位保持綠色。CmERFI-15基因的超表’達載體注射部位保持綠色,而RN Ai載體注射部位提前變黃。分子檢測結(jié)果顯示,注射CmERFI-5、CmERF1-13和CmERFI-15基因的超表達載體后,注射部位與對照相比目的基因的表達量上升,表明外源基因得到了表達；注射RNAi載體后,目的基因的表達量與對照相比下降,表明成功抑制了內(nèi)源基因的表達。果實成熟相關(guān)基因的qRT-PCR檢測表明,CmERFI-5基因沒有顯示出調(diào)控作用,CmERFI-13基因?qū)mACO1、 CmACS1、CmADH2和CmCCDl基因有正調(diào)控作用。CmERFI-15基因?qū)mACO1、CmACSl基因有負調(diào)控的作用。綜上所述,在果實成熟過程中CmERFI-5基因沒有功能,CmERFI-13基因具有促進果實成熟的功能,而CmERFI-15具有延緩果實成熟的功能。
【關(guān)鍵詞】：甜瓜 ERF 轉(zhuǎn)錄因子 瞬時表達
【學位授予單位】：內(nèi)蒙古大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：Q943.2;S652
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 1 引言11-23
• 1.1 甜瓜11-12
• 1.2 甜瓜果實發(fā)育的分子機理12-14
• 1.2.1 激素對果實發(fā)育的影響12
• 1.2.2 果實發(fā)育過程中的主要水解酶12-13
• 1.2.3 影響果皮顏色的主要色素13
• 1.2.4 果實發(fā)育中的蔗糖代謝13
• 1.2.5 芳香物質(zhì)產(chǎn)生的相關(guān)分子機理13-14
• 1.3 植物轉(zhuǎn)錄因子研究進展14-18
• 1.3.1 轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)14-15
• 1.3.2 植物轉(zhuǎn)錄因子的分類15-16
• 1.3.3 植物轉(zhuǎn)錄因子的研究方法16-18
• 1.4 乙烯信號通路研究概況18-20
• 1.4.1 乙烯受體18-19
• 1.4.2 CTR119
• 1.4.3 EIN219-20
• 1.4.4 EIN3/EILS20
• 1.4.5 ERF20
• 1.5 果實中ERF轉(zhuǎn)錄因子的研究進展20-22
• 1.6 本研究的目的和意義22-23
• 2 材料與方法23-34
• 2.1 研究材料23-26
• 2.1.1 材料田間種植23
• 2.1.2 材料、菌種及主要試劑23-24
• 2.1.3 引物合成24-26
• 2.2 研究方法26-34
• 2.2.1 cDNA克隆26-27
• 2.2.2 超表達載體的構(gòu)建27-29
• 2.2.3 RNAi載體構(gòu)建29-32
• 2.2.4 甜瓜果實瞬時表達32-34
• 3 結(jié)果與分析34-58
• 3.1 CmERFI-5、CmERFI-13,CmERFI-15基因的克隆34-40
• 3.1.1 RT-PCR擴增cDNA產(chǎn)物分析34-35
• 3.1.2 重組子篩選35-38
• 3.1.3 序列分析38-40
• 3.2 超表達載體構(gòu)建40-43
• 3.2.1 重組子篩選41-42
• 3.2.2 酶切鑒定42-43
• 3.3 RNAi載體的構(gòu)建43-49
• 3.3.1 pKANNIBAL(+)載體構(gòu)建43-46
• 3.3.2 pKANNIBAL(+/-)載體構(gòu)建46-48
• 3.3.3 pART27載體的構(gòu)建48-49
• 3.4 瞬時表達結(jié)果49-53
• 3.4.1 表型觀察分析49-52
• 3.4.2 CmERFI-5基因瞬時表達表型分析52
• 3.4.3 CmERFI-13基因瞬時表達表型分析52
• 3.4.4 CmERFI-15基因瞬時表達表型分析52-53
• 3.5 分子檢測53-58
• 3.5.1 CmERFI-5、CmERFI-13和CmERFI-15基因的瞬時表達53-54
• 3.5.2 果實成熟相關(guān)基因的分子檢測54-58
• 4 討論和結(jié)論58-60
• 4.1 討論58-59
• 4.2 結(jié)論59-60
• 參考文獻60-65
• 致謝65-66
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術(shù)論文66

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 佟慶;;基因中的幽靈[J];大科技(科學之迷);2006年04期

2 KarenSchmidt,王福彭;基因與行為[J];世界科學;1998年07期

3 ;科學家首次發(fā)現(xiàn)膚色基因[J];健康生活;2006年03期

4 馮志華;;基因時代的相親術(shù)[J];生命世界;2009年05期

5 莎莉;;一個基因決定你是人[J];大科技(科學之謎);2013年01期

6 張路;基因與種族[J];百科知識;2004年09期

7 田地;基因陽光照耀我們的生活[J];百科知識;2001年05期

8 葉如欣;前景誘人的基因工程[J];生態(tài)經(jīng)濟;2002年10期

9 王漢林;;略論基因科技的社會風險問題[J];中國軟科學;2003年05期

10 侯迎;;浩瀚的基因之海[J];新知客;2008年02期

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉霞;中國南北方人基因差異0.3%[N];上�？萍紙�;2009年

2 劉霞;中國南北方人基因有0.3%的差異[N];科技日報;2009年

3 本報記者 王夕;找對象要看基因？[N];北京科技報;2010年

4 本報記者 陳永杰;南北方人基因有別[N];北京科技報;2009年

5 首都師范大學教育科學學院心理學博士 上官芳芳;天賦基因檢測 荒唐的神話[N];健康報;2010年

6 張?zhí)锟?尋找生殖功能基因[N];大眾科技報;2001年

7 本版編輯 本報記者　 吳迎春　本報記者　 余建斌　本報記者　 曲昌榮　曉鳳;基因能否支配你的人生？[N];人民日報;2006年

8 陳永杰;基因決定南方人和北方人確實有別[N];中國婦女報;2009年

9 本報記者劉小兵;淺談基因與疾病的關(guān)系[N];光明日報;2002年

10 超然;基因檢測：預測風險 指導生活[N];中國信息報;2006年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 劉維強;遺傳性多囊腎病基因變異診斷體系的建立及應用[D];南方醫(yī)科大學;2015年

2 潘美輝;人腦發(fā)育和分化相關(guān)基因cDNA的分離與克隆[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;1997年

3 張小羅;基因權(quán)利研究[D];武漢大學;2010年

4 安霞;苧麻轉(zhuǎn)抗旱基因的功能評估及抗旱轉(zhuǎn)錄組研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2015年

5 帥素容;豬生長激素（pGH）基因核苷酸多樣性、分子進化和PCR-RFLP及其遺傳效應研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學;2004年

6 呂淑敏;擬黑多刺蟻毒蕈堿型乙酰膽堿受體基因（mAchR）及抑瘤基因（QM）的克隆與表達研究[D];陜西師范大學;2008年

7 梁爾昂;中小企業(yè)成長的財務(wù)基因研究[D];山東大學;2014年

8 丁玉梅;遺傳性牙釉質(zhì)發(fā)育不全相關(guān)基因Fam83h突變的鑒定及亞細胞定位的研究[D];華中科技大學;2009年

9 郭英君;人類染色體6q23-26精神分裂癥相關(guān)基因的定位研究[D];吉林大學;2004年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 崔方元;嗜瓊膠卵鏈菌比較基因組學研究及系列瓊膠酶基因的克隆表達[D];中國海洋大學;2015年

2 黃婭;水稻包穗基因ESP2的功能分析[D];福建農(nóng)林大學;2013年

3 額賀希格;甜瓜乙烯應答因子基因CmERFI-5、CmERFI-13、CmERFI-15在果實發(fā)育過程中的功能分析[D];內(nèi)蒙古大學;2016年

4 路瑤;論基因隱私權(quán)[D];中國政法大學;2008年

5 黎洪;基因的法律屬性及權(quán)利保護機制探究[D];華東政法大學;2013年

6 周杰;不同煙草品種間花期相關(guān)基因的分子差異分析[D];西南大學;2015年

7 李春宇;水稻APX基因的克隆及其對煙草的遺傳轉(zhuǎn)化研究[D];黑龍江大學;2009年

8 司曉慧;淡水渦蟲細胞分散方法研究及干細胞表達基因pumilio的克隆與分析[D];河南師范大學;2012年

9 范丹丹;論基因歧視[D];蘇州大學;2012年

10 薛志娟;小麥脫水應答轉(zhuǎn)錄因子（DREB）基因的擴增、克隆及序列分析[D];天津師范大學;2005年

，

本文編號：885541