本文關鍵詞：轉基因水稻T-DNA側翼序列的擴增與分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《中國海洋大學》 2011年

3株新菌的分類鑒定及新型耐熱瓊膠酶基因的克隆表達

嚴書林  

【摘要】：隨著人類社會和經(jīng)濟的不斷發(fā)展,陸地資源已經(jīng)日益匱乏,為尋找支持人類進一步生存和發(fā)展的不竭資源,人們把注意力轉向了占地球總面積71 %的海洋,對海洋資源的開發(fā)利用已成為各國戰(zhàn)略性發(fā)展的主旋律。海洋是地球上最大的生物棲息地,其中生活的海洋微生物,種類眾多且在特殊環(huán)境下形成了獨特的代謝方式,成為海洋資源開發(fā)與利用的新寵。因此,對海洋微生物的生態(tài)、生理、遺傳特征和生物活性物質等的研究都具有重大的理論意義和實際價值。本文在前期進行的微生物資源多樣性研究的基礎上,對幾株新發(fā)現(xiàn)的新菌進行了分類鑒定并對其中一株新菌產(chǎn)生的瓊膠酶進行了研究。 本文對分離自青島近海的一株革蘭氏陰性、嚴格需氧的瓊脂降解菌YM01~T進行了分類學鑒定。結果表明,該菌細胞呈桿狀,具有周生鞭毛,細胞首尾相連形成長鏈。YM01~T生長需要Na~+,不需要海水。能夠水解羧甲基纖維素、淀粉、七葉靈和吐溫80,不能水解卵磷脂、明膠、尿素以及酪蛋白。甲基萘醌-7(MK-7)為該菌主要的呼吸醌。其主要的脂肪酸組分為C_(16 : 0)(38.3 %), C_(16 : 1)ω7c和/或iso-C_(15 : 0) 2-OH(29.0 %), C_(18 : 1)ω7c(9.3 %)和C_(10 : 0) 3-OH(8.2 %)。主要的極性脂為磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰甘油(PG)和氨基磷酸酯(PN)。該菌DNA的G+C含量為44.8 %。YM0~T與所有已經(jīng)報道的細菌16S rDNA序列相似性都低于91 %,構建的系統(tǒng)進化樹顯示,YM01~T屬γ-變形菌綱的交替單胞菌科,并形成了一個單獨的分支類群。根據(jù)該菌在表型特征、化學分類特征和系統(tǒng)發(fā)生分析上所表現(xiàn)出來的特殊性,認定該菌為γ-變形菌綱中的一個新屬新種,命名為嗜瓊膠卵鏈菌(Catenovulum agarivorans gen. nov. sp. nov.)。 從中國南極中山站沿岸潮間帶中分離到一株耐低溫(0-30℃)、中度喜鹽(7-8 % w/v, NaCl)的專性異養(yǎng)細菌,實驗室編號為ZS2-28~T。基于16S rDNA的系統(tǒng)發(fā)生分析表明,ZS2-28~T屬于α-變形菌綱Roseibaca, Roseinatronobacter和Rhodobaca屬細菌分類群中一個單獨的進化支,與其他已知種屬細菌的相似度均低于97 %,為一株潛在的海洋新菌。該菌能夠產(chǎn)生菌綠素-a,胞內含有聚β-羥基丁酸脂顆粒,胞外附著有分泌物。主要的細胞壁脂肪酸組分為C_(18 : 1)ω7c。主要的呼吸醌為泛醌10。主要的極性脂包括磷脂酰甘油、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰膽堿和一種無法鑒定的氨基脂。基因組DNA G+C含量為63.3 mol%。根據(jù)表型、化學分類特征以及系統(tǒng)發(fā)生分析的結果,確定ZS2-28~T代表了一個新屬新種。命名為南極紅檸檬菌(Roseicitreum antarcticum gen. nov. sp. nov)。 此外,從人類唾液樣品中分離出一株產(chǎn)可溶性棕色色素的細菌,實驗室編號為MY15~T�；�16S rDNA序列的系統(tǒng)發(fā)生分析表明,該菌株與海洋類香味菌(Myroides marinus JS-08~T)、M. odoratimimus LMG 4092~T和深海類香味菌(M. profundi D25T)親緣關系最近,序列相似性分別為96.5 %, 96.3 %和96.1 %。該菌革蘭氏染色呈陰性,細胞桿狀,不具有鞭毛,不能運動。不能產(chǎn)生Flexirubin類色素。MY15~T以甲基萘醌-6為主要的呼吸醌,C_(15:0) iso (51.2%), C_(17:0) iso 3-OH (12.9%)和C_(13:0) iso (10.5%)為主要的細胞壁脂肪酸。DNA G+C含量為34.3 mol%。根據(jù)該菌在遺傳進化與表型特征上與類香味菌屬其他細菌所表現(xiàn)出來的差異性,認定MY15T為類香味菌屬的一個新種,命名為棕色類香味菌(Myroides phaeus gen. nov. sp. nov)。 本文在對嗜瓊膠卵鏈菌YM01~T分類學研究的基礎上,對其瓊膠水解酶進行了進一步研究,發(fā)現(xiàn)YM01~T能夠產(chǎn)生耐高溫、耐蛋白酶K的瓊膠酶,在100℃和90℃分別孵育120 min和240 min后仍能保持33.3 %和44.4 %的活性。此外,利用簡并PCR和hiTail-PCR法克隆了一個瓊膠酶基因。該基因編碼781個氨基酸,理論分子量為89 kDa, SingalP分析其N-端51個氨基酸為信號肽序列,結構域分析表明該酶屬于糖苷水解酶42家族。

【關鍵詞】：
【學位授予單位】：中國海洋大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：Q93
【目錄】：

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本文編號：88369