本文關(guān)鍵詞：馬鈴薯甲蟲兩個系統(tǒng)性RNA干擾缺失基因cDNA的克隆、序列分析和時空表達

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【摘要】：【目的】克隆馬鈴薯甲蟲Leptinotarsa decemlineata(Say)兩條Sid-1基因的全長并分析其時空表達。【方法】本研究通過RT-PCR和5'/3'RACE等技術(shù)從馬鈴薯甲蟲中克隆全長序列,通過序列多重比對和系統(tǒng)發(fā)育分析研究序列的保守性和基因起源,通過階段收樣,組織解剖和qPCR技術(shù)獲得這兩個基因的時空表達。【結(jié)果】從馬鈴薯甲蟲Leptinotarsa decemlineata的4齡幼蟲中克隆得到LdeSid-1a和LdeSid-1c,其m RNA全長為2 887和3 733 bp,編碼759和782個氨基酸,分子量為86.19和90.27 ku,兩條蛋白質(zhì)序列的相似性為59%。與其它昆蟲的系統(tǒng)性RNA干擾缺失基因的比對結(jié)果顯示,LdeSid-1a和LdeSid-1c分屬于鞘翅目系統(tǒng)性RNA干擾缺失基因的兩個分支,均具有典型的11個跨膜域結(jié)構(gòu),在蛋白質(zhì)序列的N端具有4段高度保守的基序。qPCR的時序分析表明LdeSid-1a和LdeSid-1c的表達從初孵幼蟲開始逐漸上升,而LdeSid-1c在卵中的表達也較高,組織中的分布結(jié)果表明,兩個基因在所有組織中均表達,在前腸、中腸和后腸以及生殖系統(tǒng)中表達較高,在神經(jīng)系統(tǒng)中為優(yōu)勢表達。LdeSid-1a和LdeSid-1c的Gen Bank登錄號為KR153284和KR153285。【結(jié)論】LdeSid-1a和LdeSid-1c具有典型的系統(tǒng)性RNA干擾缺失基因家族的結(jié)構(gòu),時空表達和系統(tǒng)發(fā)育的結(jié)果均表明這兩條基因可能在幼蟲的高齡階段起到重要作用。
【作者單位】： 石河子大學(xué)農(nóng)學(xué)院;新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所;中國科學(xué)院微生物研究所植物基因組學(xué)國家重點實驗室;南京農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護學(xué)院農(nóng)作物生物災(zāi)害綜合治理教育部重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 馬鈴薯甲蟲 系統(tǒng)性RNA干擾缺失基因 時空表達 定量PCR mRNA水平
【基金】：新疆維吾爾自治區(qū)援疆項目:馬鈴薯甲蟲“自毀“基因鑒定和抗蟲馬鈴薯培育(30270896) 農(nóng)業(yè)部西北荒漠綠洲作物有害生物綜合治理重點實驗室開放基金:基于體色相關(guān)基因的馬鈴薯甲蟲RNA干擾效力研究(KFJJ20160101) 新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院公益性基本科研業(yè)務(wù):基于馬鈴薯甲蟲蛋白酶體的RNA干擾高效致死基因挖掘及初步應(yīng)用
【分類號】：S433
【正文快照】： 3.中國科學(xué)院微生物研究所植物基因組學(xué)國家重點實驗室,北京100101;4.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護學(xué)院農(nóng)作物生物災(zāi)害綜合治理教育部重點實驗室,南京210095)RNA干擾(RNA inteference,RNAi)是一種最早在秀麗隱桿線蟲Caenorhabditis elegans發(fā)現(xiàn),被ds RNA觸發(fā)并引起序列特異性表達沉默

【相似文獻】

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