本文關鍵詞：雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)鑒定has-miR-577和has-miR-583對FGF-21基因的靶向調控

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【摘要】：目的通過構建成纖維細胞生長因子-21基因(fibroblast growth factor 21,FGF-21)熒光素酶報告基因載體,觀察has-miR-577和has-miR-583對FGF-21基因的靶向調控。方法利用生物學信息網站對has-miR-577和has-miR-583靶向結合FGF-21 3′UTR區(qū)的位點進行分析,設計合成包含與has-miR-577和has-miR-583結合序列及其突變序列的FGF-21基因片段,構建野生型(psiCHECK2-FGF-21)和突變型(psiCHECK2-FGF-21-mut)FGF-21雙熒光素酶報告基因載體。進行雙酶切電泳和測序鑒定后,FGF-21野生型與突變型雙熒光素酶報告基因載體分別+〔hsa-miR-577模擬物、hsa-miR-583模擬物和miR無義序列陰性對照(miR negative control,miR-NC)〕轉染293T細胞,檢測熒光素酶活性,觀察has-miR-577和has-miR-583對FGF-21表達的影響。結果雙酶切電泳和測序結果顯示,野生型(psiCHECK2-FGF-21)和突變型(psiCHECK2-FGF-21-mut)基因載體片段大小、序列結果與實驗預期一致,載體構建成功。has-miR-577和has-miR-583可抑制野生型FGF-21載體的熒光表達(P0.05),而對突變型FGF-21載體的熒光表達無抑制作用。結論 has-miR-577和has-miR-583可以靶向調控FGF-21的表達。
【作者單位】： 四川大學華西醫(yī)院實驗醫(yī)學科/臨床檢驗醫(yī)學研究中心;四川大學華西醫(yī)院內分泌代謝科;
【關鍵詞】： has-miR- has-miR- 雙熒光素酶報告基因 FGF-
【基金】：國家自然科學基金青年項目(No.81501800)資助
【分類號】：R440
【正文快照】： 成纖維細胞生長因子-21(fibroblast growthfactor 21,FGF-21)是FGF家族成員之一,由肝臟分泌,與糖脂代謝密切相關,研究顯示,FGF-21具有有治療糖尿病的潛能[1]。微小RNA(microRNA,miRNA)是一組長度在17~25個核苷酸的非編碼小RNA,本課題組通過生物學軟件發(fā)現(xiàn),FGF-213′UTR區(qū)存在，

本文編號：879565