本文關(guān)鍵詞：用雙螢光素酶報(bào)告基因技術(shù)驗(yàn)證小鼠lncRNA-H19與miR-199a-5p的靶向關(guān)系

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【摘要】：目的:構(gòu)建長(zhǎng)鏈非編碼RNA-H19(lncRNA-H19)螢光素酶報(bào)告質(zhì)粒,利用雙螢光素酶報(bào)告基因技術(shù)驗(yàn)證小鼠lncRNA-H19與微小RNA-199a-5p(miR-199a-5p)的靶向關(guān)系。方法:通過生物信息學(xué)網(wǎng)站RegRNA2.0預(yù)測(cè)獲取小鼠lncRNA-H19與miR-199a-5p潛在的互補(bǔ)結(jié)合位點(diǎn)。將H19及其突變體克隆到螢光素酶載體psi CHECK-2中,構(gòu)建H19野生型和突變型質(zhì)粒,并采用酶切和測(cè)序方法鑒定psi CHECK-2-H19載體是否構(gòu)建成功。將H19野生型和突變型質(zhì)粒分別與miR-199a-5p模擬物、miR-199a-5p抑制劑、miR-199a-5p模擬物陰性對(duì)照或miR-199a-5p抑制劑陰性對(duì)照在293T細(xì)胞中共轉(zhuǎn)染。收集細(xì)胞后通過雙螢光素酶報(bào)告系統(tǒng)檢測(cè)不同組別的螢光素酶活性,從而對(duì)lncRNA-H19與miR-199a-5p的靶向調(diào)節(jié)關(guān)系進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果:構(gòu)建的重組螢光素酶報(bào)告質(zhì)粒經(jīng)酶切及測(cè)序鑒定正確,雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)顯示,與miR-199a-5p模擬物陰性對(duì)照組相比,miR-199a-5p模擬物組H19野生型報(bào)告基因的螢光素酶活性顯著降低,下降約49%左右(P0.01),而miR-199a-5p抑制劑組H19野生型報(bào)告基因的螢光素酶活性較miR-199a-5p模擬物組明顯增高(P0.01)。miR-199a-5p模擬物、miR-199a-5p抑制劑、miR-199a-5p模擬物陰性對(duì)照以及miR-199a-5p抑制劑陰性對(duì)照對(duì)H19突變型的螢光素酶活性均無(wú)明顯影響。結(jié)論:lncRNA-H19能夠靶向結(jié)合miR-199a-5p,并在轉(zhuǎn)錄后水平對(duì)其有直接抑制作用。
【作者單位】： 中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院急診科;中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院心內(nèi)科;
【關(guān)鍵詞】： 長(zhǎng)鏈非編碼RNA-H 微小RNA-a-p 雙螢光素酶報(bào)告基因
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.81270213;No.81070125;No.81670306) 廣東省科技計(jì)劃(No.2010B031600032;No.2014A020211002) 高�；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)中山大學(xué)青年教師重點(diǎn)培育項(xiàng)目(No.13ykzd16) 廣東省醫(yī)學(xué)科研基金資助項(xiàng)目(No.A2016264)
【分類號(hào)】：R3416
【正文快照】： 非編碼RNA在蛋白表達(dá)中具有重要調(diào)控作用。長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long noncoding RNA,lncRNA)是一類轉(zhuǎn)錄本長(zhǎng)度超過200個(gè)核苷酸的功能性RNA分子,其能夠從不同層面實(shí)現(xiàn)對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控作用[1]。微小RNA(microRNA,miRNA)是一類長(zhǎng)約22個(gè)核苷酸分子的內(nèi)源性非編碼RNA,通過與靶基因3’端

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1 宿華威;崔云甫;吳德全;韓德恩;;活體生物螢光成像技術(shù)新進(jìn)展[J];世界華人消化雜志;2006年24期

2 饒林,詹林盛,彭劍淳,王全立;siRNA抑制丙型肝炎病毒IRES介導(dǎo)的基因表達(dá)[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2004年01期

3 馬云云;馮龍;衛(wèi)艷萍;李月白;何婷玉;董子明;趙國(guó)強(qiáng);;帶新霉素抗性的螢光素酶報(bào)告載體的構(gòu)建[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2009年03期

4 陳五軍;路倩;匡海軍;尹凱;趙國(guó)軍;呂運(yùn)成;歐陽(yáng)新平;唐艷艷;王甲林;吳劍鋒;唐朝克;;miR-27a/b靶向沉默ABCA1對(duì)膽固醇流出的影響[J];中國(guó)病理生理雜志;2012年11期

5 朱幫福,盧茲凡,陳蘇民,陳南春,紀(jì)宗玲,張斌,柴玉波,李毅;骨形成蛋白誘導(dǎo)型真核載體的構(gòu)建及其表達(dá)[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2003年01期

6 單志新;林秋雄;譚虹虹;鄧春玉;劉曉穎;肖定璋;余細(xì)勇;;利用雙螢光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)篩選有效的siRNA[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2009年08期

7 劉睿，鄭德先，許成素，，楊桂珍，劉士廉;人淋巴細(xì)胞CD2基因5’側(cè)翼序列的克隆和鑒定[J];生物化學(xué)雜志;1994年02期

8 賴寧;李冰;王健;付欣;洪瑋;冉丕鑫;;GCLC基因上游AHR/ARNT元件負(fù)性調(diào)控GCLC基因在大鼠支氣管上皮細(xì)胞的表達(dá)[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2009年05期

9 徐明旭,程寧,楊松樺,王鶯,芮珉,丁培國(guó),張穎妹,劉雅楠,王露,韓文玲;CKLFSF1基因與CKLFSF2基因間存在的順式作用元件[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2003年03期

10 ;[J];;年期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 戴吉睿;;螢光素酶在生命科學(xué)研究中的應(yīng)用[A];第七屆全國(guó)光生物學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2010年

2 藍(lán)希;李韶菁;杜冠華;;肝X受體激活劑篩選模型的建立及其應(yīng)用[A];中國(guó)藥理學(xué)會(huì)第十次全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議專刊[C];2009年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 王林濤;1. p38對(duì)COX-2轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的作用與胰島β細(xì)胞功能關(guān)系的研究 2. 螢光素酶報(bào)告基因分析轉(zhuǎn)錄后調(diào)控元件方法研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2008年

2 楊桂花;紅系分化相關(guān)miRNA的鑒別與功能研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

3 曹麗華;不同肢端畸形中基因突變鑒定及致病機(jī)制研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2009年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 白海秀;螢火蟲生物發(fā)光的抑制劑研究[D];山東大學(xué);2015年

2 賴寧;AHR/ARNT元件抑制GCLC基因在大鼠支氣管上皮細(xì)胞的表達(dá)[D];廣州醫(yī)學(xué)院;2009年

3 丁麗麗;利用螢光酶研究植物啟動(dòng)子和植物抗逆性[D];山東師范大學(xué);2008年

本文編號(hào)：878512