本文關(guān)鍵詞：金鐵鎖FPS基因的克隆及表達(dá)分析

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【摘要】：目的從金鐵鎖Psammosilene tunicoides W.C.Wu et C.Y.Wu中克隆三萜皂苷合成途徑中的關(guān)鍵酶法尼基焦磷酸合酶基因FPS,進(jìn)行序列特征分析和不同組織中的表達(dá)情況。方法根據(jù)已獲得的金鐵鎖轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),設(shè)計(jì)FPS基因全長(zhǎng)擴(kuò)增引物,利用RT-PCR方法獲得金鐵鎖FPS基因的全長(zhǎng)c DNA序列,并進(jìn)行TA克隆、序列分析及原核表達(dá);并設(shè)計(jì)Real-time PCR擴(kuò)增引物,測(cè)定FPS在不同組織中的表達(dá)量。結(jié)果 FPS c DNA全長(zhǎng)1135bp,開(kāi)放閱讀框1029bp,編碼342個(gè)氨基酸;構(gòu)建了p EASY-E1-FPS重組質(zhì)粒,獲得穩(wěn)定的原核表達(dá)體系。Real-time PCR結(jié)果表示FPS基因在根中的表達(dá)量高于葉和莖。結(jié)論成功克隆了金鐵鎖FPS基因,構(gòu)建了穩(wěn)定的p EASY-E1-FPS原核表達(dá)體系,FPS基因的表達(dá)分析表明,FPS在金鐵鎖不同組織均有表達(dá),根中表達(dá)量最高。為進(jìn)一步研究金鐵鎖中三萜皂苷合成代謝途徑及其關(guān)建酶表達(dá)模式奠定基礎(chǔ)。
【作者單位】： 云南中醫(yī)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 金鐵鎖 法尼基焦磷酸合酶(FPS) 基因克隆 表達(dá)分析
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(No.81260609;No.81560613) 云南省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目[2014FD035,No.2015FB205(-015)]
【分類(lèi)號(hào)】：S567.239
【正文快照】： 稀有瀕危物種金鐵鎖Psammosilene tunicoides W.C.Wu etC.Y.Wu為石竹科(Caryophyllaceae)單型屬植物[1],以根入藥,是“云南白藥”的主要組成藥之一,主治跌打損傷,風(fēng)濕痛,癰疽瘡癤,創(chuàng)傷出血等癥[2],主要有效成分為金鐵鎖三萜總皂苷[3]。MVA途徑是植物體內(nèi)皂苷合成的主要途徑,在

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本文編號(hào)：861440