本文關(guān)鍵詞：內(nèi)含豬繁殖與呼吸綜合征病毒保守基因序列假病毒粒子的構(gòu)建及應用

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【摘要】：為構(gòu)建內(nèi)含豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)保守基因序列的假病毒粒子,將MS2噬菌體基因組中5′非編碼區(qū)、成熟酶蛋白基因、衣殼蛋白基因、包裝位點和復制酶基因部分起始位點的cDNA序列克隆于原核表達載體pET32a,在其下游插入PRRSV ORF7和3′非編碼區(qū)保守序列,獲得重組表達載體pET-MS2-PRRSV。將重組質(zhì)粒pET-MS2-PRRSV轉(zhuǎn)化表達菌株BL21(DE3),經(jīng)誘導表達、純化,獲得高純度的病毒樣顆粒。病毒樣顆粒經(jīng)RT-PCR和PCR鑒定含有PRRSV ORF7和3′非編碼區(qū)RNA且沒有質(zhì)粒DNA殘留,并能耐受RNase降解。采用熒光定量RT-PCR對病毒樣顆粒定值后,制備了用于PRRSV核酸檢測的標準品,該標準品模擬了真實病毒粒子的結(jié)構(gòu),無生物傳染性,經(jīng)檢測均勻性和穩(wěn)定性良好,可作為PRRSV核酸檢測的陽性標準質(zhì)控品,實現(xiàn)對核酸檢測的全程監(jiān)控。
【作者單位】： 北京出入境檢驗檢疫局;
【關(guān)鍵詞】： 豬繁殖與呼吸綜合征病毒 ORF ′非編碼區(qū) 病毒樣顆粒
【基金】：國家公益性行業(yè)科研專項資助項目(201310253)
【分類號】：S852.651
【正文快照】： *Corresponding author,E-mail:aqlzhx@126.com豬繁殖與呼吸綜合征(porcine reproductive andrespiratory syndrome,PRRS)(又名豬藍耳病)是由PRRSV引起的以母豬繁殖障礙、早產(chǎn)、流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎及仔豬呼吸綜合征為特征的高度接觸性傳染病[1]。按臨床表現(xiàn)的不同,豬藍耳病

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6 王，

本文編號：849875