本文關(guān)鍵詞：TMEM176A基因在結(jié)直腸癌中的表觀遺傳學(xué)改變及功能機(jī)制研究

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【摘要】：結(jié)直腸癌是世界常見的惡性腫瘤,是癌癥致死的主要原因之一,其發(fā)病率和死亡率具有地域差異。結(jié)直腸癌以前被認(rèn)為是西方國家的常見惡性腫瘤,然而在亞洲地區(qū),隨著飲食習(xí)慣和生活方式的改變,結(jié)直腸癌已經(jīng)成為亞洲第三大惡性腫瘤,在中國結(jié)直腸癌發(fā)病率呈逐年上升趨勢,目前仍缺乏早期診斷方法和有效的治療手段,其主要原因是發(fā)病機(jī)制不明確。表觀遺傳可以調(diào)控基因的表達(dá),基因啟動子區(qū)DNA甲基化是目前研究最廣泛的表觀遺傳改變,被認(rèn)為是腫瘤中普遍發(fā)生的分子事件。本研究通過在結(jié)直腸癌細(xì)胞系和正常結(jié)腸粘膜中進(jìn)行RNA測序分析和驗(yàn)證,鑒定出一批在腫瘤中異常表達(dá)的基因。其中TMEM176A在腫瘤中低表達(dá)。在8株結(jié)直腸癌細(xì)胞系中通過RT-PCR、MSP和硫化測序分析,發(fā)現(xiàn)TMEM 176A基因的表達(dá)受到啟動子區(qū)甲基化的調(diào)控。在96例結(jié)直腸癌組織中通過MSP發(fā)現(xiàn),TMEM 176A在結(jié)直腸癌中頻繁發(fā)生甲基化,甲基化率達(dá)到53.13%,結(jié)合臨床病理資料分析發(fā)現(xiàn)TMEM 176A的甲基化與腫瘤的轉(zhuǎn)移有關(guān)。在27對配對的結(jié)直腸癌和癌旁組織通過免疫組化分析發(fā)現(xiàn)TMEM176A的表達(dá)與TMEM 176A甲基化呈負(fù)相關(guān)(p0.05)。在不表達(dá)TMEM 176A基因的RKO細(xì)胞中通過MTT和克隆形成實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)TMEM 176A基因能抑制腫瘤生長和增殖。通過流式細(xì)胞技術(shù)分析TMEM 176A能誘導(dǎo)RKO細(xì)胞的凋亡,通過transwell實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)TMEM176A抑制RKO細(xì)胞的侵襲和遷移能力。在裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)TMEM 176A能抑制腫瘤的生長。為了明確TMEM 176A基因的作用機(jī)制,我們對TMEM 176A恢復(fù)表達(dá)前后的DLD1細(xì)胞進(jìn)行基因表達(dá)譜芯片分析,發(fā)現(xiàn)TMEM 176A恢復(fù)表達(dá)后共有394個基因的表達(dá)發(fā)生改變,其中170個基因表達(dá)上調(diào),224個基因表達(dá)下調(diào)。結(jié)論:TMEM 176A基因在結(jié)直腸癌中的表達(dá)受到啟動子區(qū)甲基化的調(diào)控,TMEM 176A甲基化與結(jié)直腸的轉(zhuǎn)移相關(guān)。TMEM 176A基因表達(dá)誘導(dǎo)結(jié)直腸癌細(xì)胞的凋亡,抑制結(jié)直腸癌的生長和轉(zhuǎn)移。
【關(guān)鍵詞】：DNA甲基化 結(jié)直腸癌 TMEM176A
【學(xué)位授予單位】：南開大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.34
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-8
• 縮略詞表8-9
• 第一章 引言9-20
• 第二章 篩選在結(jié)直腸癌中表達(dá)改變的基因并驗(yàn)證20-29
• 第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料20-21
• 第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法21-24
• 第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果24-26
• 第四節(jié) 討論26-28
• 第五節(jié) 小結(jié)28-29
• 第三章 TMEM176A在結(jié)直腸癌中的表達(dá)受啟動子區(qū)甲基化的調(diào)控29-41
• 第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料29-31
• 第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法31-37
• 第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果37-39
• 第四節(jié) 討論39-40
• 第五節(jié) 小結(jié)40-41
• 第四章 TMEM176A在結(jié)直腸癌中的功能研究41-50
• 第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料41-42
• 第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法42-44
• 第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果44-48
• 第四節(jié) 討論48-49
• 第五節(jié) 小結(jié)49-50
• 第五章 TMEM176A在結(jié)直腸癌中的作用機(jī)制探索50-62
• 第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料50-51
• 第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法51-52
• 第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果52-60
• 第四節(jié) 討論60-61
• 第五節(jié) 小結(jié)61-62
• 第六章 總結(jié)62-63
• 參考文獻(xiàn)63-71
• 致謝71-72
• 個人簡歷72

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本文編號：837858