本文關(guān)鍵詞：LPS對(duì)卵泡顆粒層和膜層細(xì)胞Toll受體基因表達(dá)和類固醇激素合成的影響

  更多相關(guān)文章： 鵝 等級(jí)卵泡 Toll樣受體 內(nèi)毒素 性類固醇激素合成

【摘要】：為研究種鵝等級(jí)卵泡的病原識(shí)別模式受體和內(nèi)分泌功能對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素(LPS)的反應(yīng)性,探討Toll樣受體(TLRs)在種鵝生殖免疫中的作用及其與生殖內(nèi)分泌的關(guān)系,以加深對(duì)生殖系統(tǒng)感染和生殖調(diào)控的理解,尋找有效的治療方法和免疫新靶位,我們以產(chǎn)蛋期揚(yáng)州鵝為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,在種鵝產(chǎn)蛋后8h和2h以及產(chǎn)蛋前4h、16h和28h翅靜脈注射LPS(1.5 mg/kg BW),在其產(chǎn)蛋8h后翅靜脈采集血液,并屠宰采集卵巢卵泡,觀察卵泡外觀形態(tài),分離等級(jí)卵泡的膜層和顆粒層。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(q RT-PCR)和放射免疫分析法等技術(shù)分別研究種鵝產(chǎn)蛋期卵泡顆粒層(GL)和膜層(TL)的TLRs表達(dá)譜及表達(dá)差異;TLRs在不同生長期卵泡GL和TL的表達(dá)差異;LPS處理0h,6h,12h,24h和36h后卵泡外觀形態(tài)的變化及GL和TL TLRs的表達(dá)變化,以及血液中孕酮(P4)和雌二醇(E2)的濃度及其合成限速酶基因類固醇激素合成急性調(diào)節(jié)蛋白(St AR),膽固醇側(cè)鏈裂解酶基因(CYP11A1),17ɑ-羥化酶和17,20裂解酶基因(CYP17A1),細(xì)胞色素P450芳香化酶基因(CYP19A1)的表達(dá)變化。結(jié)果顯示,顆粒細(xì)胞中,除了TLR2-2幾乎不表達(dá),其余所有的TLRs成員,包括TLR1-1,TLR1-2,TLR2-1,TLR3,TLR4,TLR5,TLR7,TLR15和TLR21都表達(dá);膜細(xì)胞則表達(dá)所有禽類TLRs成員。產(chǎn)蛋期種鵝,4個(gè)TLRs家族基因在GL中的表達(dá)水平極顯著高于TL(P0.01),3個(gè)TLRs成員在TL的表達(dá)量極顯著高于GL(P0.01)。隨著卵泡的生長發(fā)育,各個(gè)TLRs的表達(dá)水平相對(duì)較穩(wěn)定,僅TLR15在GL中的表達(dá)水平隨卵泡發(fā)育而增強(qiáng)(P0.05),TLR2-1和TLR15在TL中的表達(dá)水平隨卵泡發(fā)育顯著增強(qiáng)(P0.05)。LPS處理12小時(shí)內(nèi),等級(jí)卵泡外觀形態(tài)無明顯變化,24h時(shí),部分鵝卵泡出現(xiàn)不規(guī)則的膠凍狀變性,而36h時(shí),所有實(shí)驗(yàn)鵝卵泡皆出現(xiàn)膠凍狀變性。GL中8個(gè)TLRs家族基因的表達(dá)水平隨LPS作用時(shí)間增加而顯著增強(qiáng)(P0.01),而TLR3的表達(dá)水平呈現(xiàn)減弱的趨勢,這些TLRs出現(xiàn)差異顯著的時(shí)間點(diǎn)不同。與在GL不同的是,TL中,10個(gè)TLRs家族基因在LPS作用后其表達(dá)水平都逐步增強(qiáng),并于不同時(shí)間點(diǎn)達(dá)到差異極顯著(P0.01)。LPS處理后,鵝血液中P4和E2的濃度顯著降低(P0.01),都于12h時(shí)達(dá)到差異顯著,而其合成限速酶基因St AR和CYP11A1,CYP17A1和CYP19A1的表達(dá)也減弱,分別于6h,6h,12h和6h時(shí)發(fā)生顯著改變(P0.01),其中St AR的表達(dá)水平呈現(xiàn)先增強(qiáng)后減弱的趨勢。綜合上述試驗(yàn)結(jié)果表明,種鵝卵泡中表達(dá)各個(gè)TLRs家族基因,存在TLRs介導(dǎo)的先天性免疫反應(yīng)。顆粒細(xì)胞和膜細(xì)胞對(duì)不同病原微生物的敏感性不同,其潛在的抵御病原微生物的能力也不同。隨著種鵝卵泡的生長發(fā)育,顆粒細(xì)胞和膜細(xì)胞的病原識(shí)別能力增強(qiáng)。LPS直接危害卵泡發(fā)育及排卵,所有禽類TLRs家族基因的表達(dá)水平都隨之發(fā)生顯著變化,并可分為早期,中期和后期應(yīng)答基因,早期卵泡損傷小,是治療LPS入侵的最佳時(shí)期。此外,LPS還降低P4和E2的合成及其關(guān)鍵限速酶基因的表達(dá),危害鵝的生殖內(nèi)分泌�；谘芯拷Y(jié)果,我們推測LPS入侵后,卵泡通過TLRs介導(dǎo)性類固醇激素的合成,且這一過程可能存在時(shí)間依賴性。本研究對(duì)水禽業(yè)養(yǎng)殖環(huán)境的控制及開發(fā)內(nèi)毒素抑制劑、新型減毒疫苗和佐劑可提供參考,對(duì)水禽生殖免疫和生殖內(nèi)分泌,及兩者之間關(guān)系進(jìn)行了初步探討,為其深入研究奠定基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：鵝 等級(jí)卵泡 Toll樣受體 內(nèi)毒素 性類固醇激素合成
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S835
【目錄】：

• 符號(hào)說明5-9
• 中文摘要9-11
• 英文摘要11-13
• 1 前言13-28
• 1.1 TLRs的概述14-21
• 1.1.1 TLRs的結(jié)構(gòu)14-15
• 1.1.2 TLRs的配體15
• 1.1.3 TLRs的分布15-16
• 1.1.4 TLRs信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑16-18
• 1.1.5 TLRs在免疫系統(tǒng)中的作用18
• 1.1.6 TLRs與生殖免疫調(diào)節(jié)18-21
• 1.2 LPS的概述21-25
• 1.2.1 LPS的結(jié)構(gòu)21-22
• 1.2.2 LPS的受體22-23
• 1.2.3 LPS的信號(hào)通路23-24
• 1.2.4 水禽養(yǎng)殖環(huán)境LPS的來源24-25
• 1.2.5 LPS對(duì)種鵝的危害25
• 1.3 P4、E2與其合成關(guān)鍵限速酶基因的概述25-27
• 1.4 TLRs與P4、E2的關(guān)系27-28
• 1.5 本研究的目的意義28
• 2 材料與方法28-36
• 2.1 材料28-29
• 2.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及場地28
• 2.1.2 試驗(yàn)試劑28
• 2.1.3 試驗(yàn)儀器設(shè)備28-29
• 2.2 試驗(yàn)方法29-36
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及處理29
• 2.2.2 樣品采集及處理29-30
• 2.2.3 P4和E2的測定30-31
• 2.2.4 總RNA提取和反轉(zhuǎn)錄31-33
• 2.2.5 引物設(shè)計(jì)33-34
• 2.2.6 目的片段RT-PCR擴(kuò)增和測序34
• 2.2.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析34-35
• 2.2.8 數(shù)據(jù)分析35-36
• 3 結(jié)果與分析36-44
• 3.1 總RNA質(zhì)量檢測36
• 3.2 等級(jí)卵泡TLRs的表達(dá)譜36-37
• 3.3 種鵝等級(jí)卵泡顆粒層和膜層TLRs家族基因的差異表達(dá)37-38
• 3.4 種鵝不同大小卵泡TLRs家族基因的差異表達(dá)38-40
• 3.5 LPS對(duì)種鵝卵巢卵泡外觀形態(tài)的影響40
• 3.6 LPS對(duì)種鵝等級(jí)卵泡TLRs的影響40-42
• 3.7 LPS對(duì)種鵝P4、E2及其合成關(guān)鍵限速酶基因的影響42-44
• 4 討論44-50
• 4.1 種鵝等級(jí)卵泡顆粒細(xì)胞和膜細(xì)胞TLRs家族基因的表達(dá)44-45
• 4.2 種鵝不同大小卵泡TLRs家族基因的表達(dá)45-46
• 4.3 LPS對(duì)卵巢卵泡外觀形態(tài)及TLRs表達(dá)的影響46-48
• 4.4 LPS對(duì)種鵝P4、E2及其關(guān)鍵限速酶基因表達(dá)的影響48-50
• 5 結(jié)論50-51
• 6 參考文獻(xiàn)51-61
• 7 致謝61-62
• 8 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況62

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 岳文斌;免疫家畜類固醇激素的應(yīng)用[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);1989年12期

2 張習(xí)藝;邱忠權(quán);;高效液相色譜法定性測定牦牛被毛和血漿中的類固醇激素[J];西南民族學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);1992年01期

3 顧憲紅;動(dòng)物血漿類固醇激素的放射免疫測定[J];中國飼料;1997年24期

4 ;書刊評(píng)介[J];動(dòng)物學(xué)雜志;1958年02期

5 陶勇;類固醇激素免疫的研究進(jìn)展[J];畜牧獸醫(yī)雜志;1999年02期

6 趙維信;譚玉鈞;姜仁良;康春曉;;誘導(dǎo)鰱排卵時(shí)性類固醇激素含量的變化[J];水生生物學(xué)報(bào);1988年03期

7 陶勇;動(dòng)物類固醇激素免疫的研究進(jìn)展[J];黑龍江動(dòng)物繁殖;1998年03期

8 楊明;李艷霞;馮成洪;張雪蓮;劉姝芳;林建德;;類固醇激素的環(huán)境行為及其影響因素[J];農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào);2012年05期

9 張肖;丁長青;;糞便類固醇激素檢測準(zhǔn)確性的影響因素[J];動(dòng)物學(xué)雜志;2012年05期

10 應(yīng)素燕;王衛(wèi)平;頡志剛;陳建榮;;膠束電動(dòng)色譜法快速測定魚血液中的類固醇激素[J];浙江師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2013年03期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 楊明;李艷霞;馮成洪;張雪蓮;劉淑芳;林建德;;類固醇激素的環(huán)境行為及其影響因素[A];十一五農(nóng)業(yè)環(huán)境研究回顧與展望——第四屆全國農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2011年

2 潘燕云;孫挺;馮健;;注射促黃體素釋放激素類似物對(duì)泥鰍血清性類固醇激素變化研究[A];中國魚類學(xué)會(huì)2008學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2008年

3 寧艷霞;李曉波;馬永杰;柏乾明;田玳;殷蓮華;;類固醇激素合成急性調(diào)節(jié)蛋白(StAR)在脂質(zhì)代謝及相關(guān)疾病中的作用及其機(jī)制研究[A];中國生理學(xué)會(huì)第十一屆張錫鈞基金全國青年優(yōu)秀生理學(xué)學(xué)術(shù)論文交流及評(píng)獎(jiǎng)會(huì)議綜合摘要[C];2011年

4 方永強(qiáng);;文昌魚哈氏窩結(jié)構(gòu)功能的神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)研究進(jìn)展[A];中國動(dòng)物科學(xué)研究——中國動(dòng)物學(xué)會(huì)第十四屆會(huì)員代表大會(huì)及中國動(dòng)物學(xué)會(huì)65周年年會(huì)論文集[C];1999年

5 朱華平;莫嬡嬡;盧邁新;高風(fēng)英;葉星;黃樟翰;可小麗;;17α-甲基睪丸酮和來曲唑?qū)α_非魚類固醇激素合成酶基因表達(dá)的影響[A];漁業(yè)科技創(chuàng)新與發(fā)展方式轉(zhuǎn)變——2011年中國水產(chǎn)學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2011年

6 李春旺;蔣志剛;曾巖;夏經(jīng)世;張林源;唐保田;;麋鹿副產(chǎn)品的藥用基礎(chǔ)數(shù)據(jù)與北京麋鹿的保護(hù)[A];21世紀(jì)新北京生態(tài)生物學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2001年

7 李冬;;美能治療顏面類固醇激素皮炎臨床觀察[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第14次全國皮膚性病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 蘇平;有早產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)的孕婦慎用激素[N];中國醫(yī)藥報(bào);2004年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 王玉邦;鄰苯二甲酸單丁酯影響類固醇激素合成的機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2007年

2 夏小春;環(huán)氧二烯Mycoepoxydiene和類固醇激素受體輔激活子3（SRC-3）在過敏發(fā)生過程中作用的機(jī)制研究[D];廈門大學(xué);2013年

3 黃英;神農(nóng)架川金絲猴糞便類固醇激素的非損傷性測定及其指示作用研究[D];北京林業(yè)大學(xué);2009年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 魏巍;HPLC-MS/MS檢測牛乳中類固醇激素及乳的安全性分析[D];哈爾濱工業(yè)大學(xué);2016年

2 曹宇彤;不同泌乳期中國漢族人乳類固醇組學(xué)分析[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

3 郭佳佳;LPS對(duì)卵泡顆粒層和膜層細(xì)胞Toll受體基因表達(dá)和類固醇激素合成的影響[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

4 譚麗超;水環(huán)境中類固醇激素的污染特征及健康風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

5 郭彥嬌;朱瀗（Nipponia nippon）糞便中類固醇激素的研究[D];北京林業(yè)大學(xué);2013年

6 夏露;膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因在鵝卵泡類固醇激素合成中的作用研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

7 米曉霞;禽蛋及豬血漿中類固醇激素含量的檢測—液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLC-MS/MS）[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2014年

8 胡海平;類固醇激素在典型土壤中的吸附和降解特征[D];太原理工大學(xué);2013年

9 張肖;朱瀗（Nipponia nippon）糞便中類固醇激素和免疫球蛋白的研究[D];北京林業(yè)大學(xué);2012年

10 康占省;動(dòng)物源性食品中類固醇激素殘留的檢測方法研究[D];河北大學(xué);2011年

，

本文編號(hào)：835072