本文關鍵詞：鐵皮石斛UGPase基因克隆表達分析及部分MYB基因家族分子克隆與溫度脅迫分析

  更多相關文章： UGPase MYB 鐵皮石斛 多糖 溫度脅迫 實時熒光定量PCR

【摘要】：UGPase是植物生長和糖分代謝通路的重要激酶之一,對鐵皮石斛的生長和糖分的累積起著至關重要的作用。MYB轉錄因子家族是植物中最重要的基因家族之一,其中許多成員與植物的抗逆性有著緊密的關系。所以本次實驗從這兩個面著手研究。首先利用RACE技術克隆得到鐵皮石斛UGPase1的全長為3054bp的基因序列,其中開放閱讀框長度為1530bp,一共編碼了510個氨基酸,預測其編碼的蛋白質(zhì)序列分子量為51.7 kDa,性質(zhì)為其為親水性蛋白。對UGPase1基因發(fā)育進化樹分析發(fā)現(xiàn),UGPase1蛋白僅與油棕和波斯棗有一定的同源性。利用在線軟件Expasy和SWISS-MODEL對其蛋白結構進行預測分析。隨后利用實時熒光定量PCR技術分析UGPase1在鐵皮石斛不同組織,不同生長年齡中的表達量。分析發(fā)現(xiàn),在根莖葉三者相比較的時,根和莖中的表達量遠遠高于葉片中的表達量。在不同年份石斛材料分析時發(fā)現(xiàn),1年和3年的材料中UGPase1基因整體表達高于6年等重要信息。通過閱讀對比分析鐵皮石斛多糖累積的文獻,發(fā)現(xiàn)UGPase1基因的含量可能與糖分累積過程的活躍度和生長狀態(tài)成正比例。其次一共得到克隆MYB轉錄因子家族中的12條序列,長度范圍在983-2320bp,編碼氨基酸范圍203-410個之間,對其進行亞細胞預測分析。對已得到的序列建立進化樹分析,利用MEME軟件分析其氨基酸序列之間的相似性和預測序列的保守結構域。選出一個R1型MYB轉錄因子DoMYB04,進行蛋白質(zhì)結構預測分析,之后在利用熒光定量PCR分析該基因在冷熱溫度脅迫下表達量的變化。實驗發(fā)現(xiàn)DoMYB04基因表達量與溫度的變化存在明顯關系。所以推測在溫度脅迫中,鐵皮石斛植株能夠保持正常的生理狀態(tài),有可能與DoMYB04基因表達量的變化有關。
【關鍵詞】：UGPase MYB 鐵皮石斛 多糖 溫度脅迫 實時熒光定量PCR
【學位授予單位】：西南交通大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：Q943.2
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-10
• 第1章 緒論10-19
• 1.1 鐵皮石斛多糖的研究10-12
• 1.1.1 鐵皮石斛多糖的理化性質(zhì)與結構組成10-11
• 1.1.2 鐵皮石斛多糖的生物功能11-12
• 1.1.3 鐵皮石斛多糖的分布與累積規(guī)律12
• 1.2 尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶的簡介12-14
• 1.2.1 尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因的生物學功能12-13
• 1.2.2 研究尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因生物學意義13-14
• 1.3 植物中的MYB基因家族14-17
• 1.3.1 MYB轉錄因子的發(fā)現(xiàn)14
• 1.3.2 MYB轉錄因子結構與特征14-15
• 1.3.3 MYB轉錄因子的生物學功能15-17
• 1.4 本篇論文研究意義17-19
• 第2章 鐵皮石斛UGPase1基因分子克隆及在不同組織中的定量分析19-36
• 2.1 實驗材料19
• 2.2 實驗儀器及試劑19-20
• 2.2.1 實驗儀器19-20
• 2.2.2 實驗試劑20
• 2.3 實驗方法20-27
• 2.3.1 總RNA的提取和cDNA的生成20-22
• 2.3.2 UGPase1基因引物設計22
• 2.3.3 UGPase1基因的克隆22-24
• 2.3.4 PCR產(chǎn)物的回收及載體的連接24-25
• 2.3.5 DH5α感受態(tài)的制備及連接產(chǎn)物的轉化25-26
• 2.3.6 生物信息學分析26-27
• 2.3.7 定量RT-PCR分析27
• 2.4 實驗結果與分析27-31
• 2.4.1 RNA的提取27-28
• 2.4.2 UGPase1全長的克隆及分析28-29
• 2.4.3 UGPase1基因生物信息學的分析29-31
• 2.5 不同年份,不同組織鐵皮石斛中的UGPase1基因地相對表達量的測定31-35
• 2.6 討論35-36
• 第3章 鐵皮石斛MYB轉錄因子家族部分的分子克隆及DoMYB04溫度脅迫下表達量的差異36-51
• 3.1 實驗材料36-37
• 3.1.1 植物材料36
• 3.1.2 實驗儀器與試劑36-37
• 3.1.3 載體和菌種37
• 3.1.4 實驗培養(yǎng)基的配置37
• 3.2 實驗方法37-42
• 3.2.1 鐵皮石斛的培養(yǎng)37-38
• 3.2.2 總RNA的提取和cDNA的生成38-39
• 3.2.3 部分MYB基因家族序列的引物設計39
• 3.2.4 部分MYB基因家族序列的CDS克隆39-40
• 3.2.5 PCR產(chǎn)物的回收及載體的連接40-41
• 3.2.6 生物信息學分析41
• 3.2.7 定量RT-PCR的分析41-42
• 3.3 結果分析42-49
• 3.3.1 總RNA的提取42-43
• 3.3.2 部分MYB基因家族的克隆及分析43-45
• 3.3.3 DoMYB04序列分析及生物信息學分析45-47
• 3.3.4 DoMYB04基因在溫度脅迫下的相對表達量47-49
• 3.4 討論49-51
• 結論與展望51-53
• 1. 研究結論51-52
• 2. 研究展望52-53
• 致謝53-54
• 參考文獻54-60
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文60-61
• 附錄61-67

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