本文關(guān)鍵詞：鐵皮石斛UGPase基因克隆表達(dá)分析及部分MYB基因家族分子克隆與溫度脅迫分析

  更多相關(guān)文章： UGPase MYB 鐵皮石斛 多糖 溫度脅迫 實(shí)時(shí)熒光定量PCR

【摘要】：UGPase是植物生長和糖分代謝通路的重要激酶之一,對(duì)鐵皮石斛的生長和糖分的累積起著至關(guān)重要的作用。MYB轉(zhuǎn)錄因子家族是植物中最重要的基因家族之一,其中許多成員與植物的抗逆性有著緊密的關(guān)系。所以本次實(shí)驗(yàn)從這兩個(gè)面著手研究。首先利用RACE技術(shù)克隆得到鐵皮石斛UGPase1的全長為3054bp的基因序列,其中開放閱讀框長度為1530bp,一共編碼了510個(gè)氨基酸,預(yù)測(cè)其編碼的蛋白質(zhì)序列分子量為51.7 kDa,性質(zhì)為其為親水性蛋白。對(duì)UGPase1基因發(fā)育進(jìn)化樹分析發(fā)現(xiàn),UGPase1蛋白僅與油棕和波斯棗有一定的同源性。利用在線軟件Expasy和SWISS-MODEL對(duì)其蛋白結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測(cè)分析。隨后利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)分析UGPase1在鐵皮石斛不同組織,不同生長年齡中的表達(dá)量。分析發(fā)現(xiàn),在根莖葉三者相比較的時(shí),根和莖中的表達(dá)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于葉片中的表達(dá)量。在不同年份石斛材料分析時(shí)發(fā)現(xiàn),1年和3年的材料中UGPase1基因整體表達(dá)高于6年等重要信息。通過閱讀對(duì)比分析鐵皮石斛多糖累積的文獻(xiàn),發(fā)現(xiàn)UGPase1基因的含量可能與糖分累積過程的活躍度和生長狀態(tài)成正比例。其次一共得到克隆MYB轉(zhuǎn)錄因子家族中的12條序列,長度范圍在983-2320bp,編碼氨基酸范圍203-410個(gè)之間,對(duì)其進(jìn)行亞細(xì)胞預(yù)測(cè)分析。對(duì)已得到的序列建立進(jìn)化樹分析,利用MEME軟件分析其氨基酸序列之間的相似性和預(yù)測(cè)序列的保守結(jié)構(gòu)域。選出一個(gè)R1型MYB轉(zhuǎn)錄因子DoMYB04,進(jìn)行蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)分析,之后在利用熒光定量PCR分析該基因在冷熱溫度脅迫下表達(dá)量的變化。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)DoMYB04基因表達(dá)量與溫度的變化存在明顯關(guān)系。所以推測(cè)在溫度脅迫中,鐵皮石斛植株能夠保持正常的生理狀態(tài),有可能與DoMYB04基因表達(dá)量的變化有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：UGPase MYB 鐵皮石斛 多糖 溫度脅迫 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
【學(xué)位授予單位】：西南交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：Q943.2
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-10
• 第1章 緒論10-19
• 1.1 鐵皮石斛多糖的研究10-12
• 1.1.1 鐵皮石斛多糖的理化性質(zhì)與結(jié)構(gòu)組成10-11
• 1.1.2 鐵皮石斛多糖的生物功能11-12
• 1.1.3 鐵皮石斛多糖的分布與累積規(guī)律12
• 1.2 尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶的簡介12-14
• 1.2.1 尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因的生物學(xué)功能12-13
• 1.2.2 研究尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因生物學(xué)意義13-14
• 1.3 植物中的MYB基因家族14-17
• 1.3.1 MYB轉(zhuǎn)錄因子的發(fā)現(xiàn)14
• 1.3.2 MYB轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)與特征14-15
• 1.3.3 MYB轉(zhuǎn)錄因子的生物學(xué)功能15-17
• 1.4 本篇論文研究意義17-19
• 第2章 鐵皮石斛UGPase1基因分子克隆及在不同組織中的定量分析19-36
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料19
• 2.2 實(shí)驗(yàn)儀器及試劑19-20
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器19-20
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑20
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法20-27
• 2.3.1 總RNA的提取和cDNA的生成20-22
• 2.3.2 UGPase1基因引物設(shè)計(jì)22
• 2.3.3 UGPase1基因的克隆22-24
• 2.3.4 PCR產(chǎn)物的回收及載體的連接24-25
• 2.3.5 DH5α感受態(tài)的制備及連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化25-26
• 2.3.6 生物信息學(xué)分析26-27
• 2.3.7 定量RT-PCR分析27
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析27-31
• 2.4.1 RNA的提取27-28
• 2.4.2 UGPase1全長的克隆及分析28-29
• 2.4.3 UGPase1基因生物信息學(xué)的分析29-31
• 2.5 不同年份,不同組織鐵皮石斛中的UGPase1基因地相對(duì)表達(dá)量的測(cè)定31-35
• 2.6 討論35-36
• 第3章 鐵皮石斛MYB轉(zhuǎn)錄因子家族部分的分子克隆及DoMYB04溫度脅迫下表達(dá)量的差異36-51
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料36-37
• 3.1.1 植物材料36
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑36-37
• 3.1.3 載體和菌種37
• 3.1.4 實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基的配置37
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法37-42
• 3.2.1 鐵皮石斛的培養(yǎng)37-38
• 3.2.2 總RNA的提取和cDNA的生成38-39
• 3.2.3 部分MYB基因家族序列的引物設(shè)計(jì)39
• 3.2.4 部分MYB基因家族序列的CDS克隆39-40
• 3.2.5 PCR產(chǎn)物的回收及載體的連接40-41
• 3.2.6 生物信息學(xué)分析41
• 3.2.7 定量RT-PCR的分析41-42
• 3.3 結(jié)果分析42-49
• 3.3.1 總RNA的提取42-43
• 3.3.2 部分MYB基因家族的克隆及分析43-45
• 3.3.3 DoMYB04序列分析及生物信息學(xué)分析45-47
• 3.3.4 DoMYB04基因在溫度脅迫下的相對(duì)表達(dá)量47-49
• 3.4 討論49-51
• 結(jié)論與展望51-53
• 1. 研究結(jié)論51-52
• 2. 研究展望52-53
• 致謝53-54
• 參考文獻(xiàn)54-60
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文60-61
• 附錄61-67

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 韓曉紅;周全;段春紅;;以鐵皮石斛快繁項(xiàng)目為基點(diǎn)談教學(xué)研一體化[J];現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技;2011年09期

2 李娟;李順祥;黃丹;趙興兵;蔡光先;;鐵皮石斛資源、化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J];科技導(dǎo)報(bào);2011年18期

3 吳慧鳳;宋希強(qiáng);劉紅霞;;鐵皮石斛種子的室內(nèi)共生萌發(fā)[J];生態(tài)學(xué)報(bào);2012年08期

4 葉煒;;鐵皮石斛多糖累積規(guī)律研究進(jìn)展(綜述)[J];亞熱帶植物科學(xué);2013年04期

5 張書霞,張海賓;鐵皮石斛生理生化性質(zhì)的研究[J];信陽師范學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2005年02期

6 姜殿強(qiáng);劉再華;申宏崗;廖長君;;巖溶生態(tài)環(huán)境條件下不同生境鐵皮石斛多糖含量的比較研究[J];中國巖溶;2007年03期

7 徐程;詹忠根;廖蘇梅;;8種不同地域鐵皮石斛農(nóng)藝性狀及多糖和纖維素分析[J];浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(理學(xué)版);2008年05期

8 何濤;淳澤;汪天杰;鄭若劫;;鐵皮石斛腋芽的快速繁殖[J];中國野生植物資源;2010年01期

9 冉景丞;徐琳娜;魯成巍;劉靜;;茂蘭保護(hù)區(qū)鐵皮石斛大棚栽培方法初探[J];井岡山大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2010年05期

10 艾娟;嚴(yán)寧;胡虹;李樹云;;溫度對(duì)鐵皮石斛生長及生理特性的影響[J];云南植物研究;2010年05期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 諸燕;斯金平;張愛蓮;;人工栽培鐵皮石斛多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)研究[A];第八屆全國藥用植物及植物藥學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

2 陳立鉆;倪云霞;孫繼軍;范華芬;許安玲;;鐵皮石斛傳統(tǒng)加工品與機(jī)械加工品的多糖含量對(duì)比研究[A];全國第六屆天然藥物資源學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2004年

3 郭英英;劉京晶;斯金平;;雁蕩山不同樹種活樹附生鐵皮石斛多糖含量差異比較[A];生態(tài)文明建設(shè)中的植物學(xué)：現(xiàn)在與未來——中國植物學(xué)會(huì)第十五屆會(huì)員代表大會(huì)暨八十周年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集——第4分會(huì)場(chǎng)：資源植物學(xué)[C];2013年

4 王伯初;李標(biāo);;響應(yīng)聲波加載的鐵皮石斛差異表達(dá)基因篩選及其功能初步研究[A];2008年全國生物流變學(xué)與生物力學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2008年

5 丁小余;侯北偉;謝明璐;;珍稀鐵皮石斛基于微衛(wèi)星標(biāo)記的種質(zhì)鑒別與保護(hù)遺傳學(xué)研究[A];第九屆全國藥用植物及植物藥學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

6 朱波;斯金平;苑鶴;;鐵皮石斛雜交育種的初步研究[A];第九屆全國藥用植物及植物藥學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

7 李宏博;張宏宇;樸鐘云;;鐵皮石斛組織培養(yǎng)研究[A];第九屆全國藥用植物及植物藥學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

8 斯金平;;鐵皮石斛可持續(xù)發(fā)展關(guān)鍵技術(shù)研究進(jìn)展[A];第十屆全國藥用植物及植物藥學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2011年

9 金璐英;斯金平;張愛蓮;魏濤;莫伊娜;;鐵皮石斛中基本氨基酸含量變異規(guī)律[A];第十屆全國藥用植物及植物藥學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2011年

10 張治國;劉驊;夏志俊;王君暉;黃純農(nóng);;鐵皮石斛種子的超低溫保存[A];中國植物生理學(xué)會(huì)全國學(xué)術(shù)年會(huì)暨成立40周年慶祝大會(huì)學(xué)術(shù)論文摘要匯編[C];2003年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 本報(bào)記者 王晶晶;鐵皮石斛扎根浙江[N];中國經(jīng)濟(jì)導(dǎo)報(bào);2006年

2 施仁潮;鐵皮石斛研究成果驗(yàn)收[N];科技日?qǐng)?bào);2006年

3 張文聰;做大鐵皮石斛種植業(yè) 幫助群眾走上致富路[N];韶關(guān)日?qǐng)?bào);2007年

4 本報(bào)記者 何潭振 戴正聰;讓所有老百姓都能吃得起鐵皮石斛[N];中國食品質(zhì)量報(bào);2006年

5 本報(bào)記者　 王蔚佳;鐵皮石斛神話如何延續(xù)[N];中國醫(yī)藥報(bào);2006年

6 施文;浙江將出臺(tái)鐵皮石斛品種標(biāo)準(zhǔn)[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2006年

7 本報(bào)記者 施仁潮;他讓瀕危中藥鐵皮石斛重獲新生[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2008年

8 中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì) 莊乾竹;寶寶能喝鐵皮石斛水嗎？[N];健康時(shí)報(bào);2008年

9 王英;“工廠”里種出鐵皮石斛[N];蘇州日?qǐng)?bào);2008年

10 收集整理 軍野;鐵皮石斛的文化淵源[N];世界報(bào);2008年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 孫婧;鐵皮石斛提取物及其活性成分毛蘭素對(duì)人乳腺癌細(xì)胞抑制作用的研究[D];吉林大學(xué);2016年

2 徐程;鐵皮石斛種質(zhì)資源與組培工廠化生產(chǎn)研究[D];浙江大學(xué);2006年

3 包英華;鐵皮石斛種質(zhì)資源的鑒定與評(píng)價(jià)研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2014年

4 嚴(yán)亮;中國傳統(tǒng)蘭科藥用植物鐵皮石斛基因組及其生物學(xué)特性研究[D];吉林大學(xué);2014年

5 張澤錦;鐵皮石斛的光合碳同化途徑及其對(duì)環(huán)境變化的生理響應(yīng)[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

6 趙興兵;超微鐵皮石斛對(duì)脾虛便秘小鼠腸道微生物的影響研究[D];湖南中醫(yī)藥大學(xué);2014年

7 李標(biāo);聲波刺激對(duì)鐵皮石斛生長代謝的影響及其相關(guān)基因表達(dá)和克隆研究[D];重慶大學(xué);2007年

8 滕建北;鐵皮石斛與美花石斛莖尖生長機(jī)理及其多糖累積規(guī)律研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2009年

9 關(guān)杰敏;鐵皮石斛良種繁育與GAP種植關(guān)鍵技術(shù)研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2014年

10 何鐵光;鐵皮石斛原球莖多糖的誘導(dǎo)、提純、理化性質(zhì)及生物活性研究[D];廣西大學(xué);2007年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 諸燕;鐵皮石斛種質(zhì)資源收集與評(píng)價(jià)[D];浙江農(nóng)林大學(xué);2010年

2 辛甜;組培鐵皮石斛的品質(zhì)評(píng)價(jià)研究[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2011年

3 戴燕萍;鐵皮石斛生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范研究[D];浙江農(nóng)林大學(xué);2012年

4 王俊潔;鐵皮石斛體細(xì)胞無性變異的生藥學(xué)初步研究[D];云南中醫(yī)學(xué)院;2012年

5 李東賓;冷脅迫下鐵皮石斛抗寒基因的克隆與表達(dá)研究[D];浙江農(nóng)林大學(xué);2013年

6 馮云;鐵皮石斛儲(chǔ)藏與加工特性研究[D];華南理工大學(xué);2015年

7 鄧星燕;鐵皮石斛紫外指紋圖譜研究[D];云南民族大學(xué);2015年

8 朱夢(mèng)麗;鐵皮石斛甘露糖結(jié)合凝集素的分子建模與對(duì)接研究，，及NAC基因組序列的克隆[D];西南交通大學(xué);2015年

9 陳爾;鐵皮石斛組培快繁技術(shù)的優(yōu)化[D];中南林業(yè)科技大學(xué);2015年

10 任潔;鐵皮石斛組培苗培養(yǎng)及叢生芽增殖體系的建立[D];南京師范大學(xué);2015年

本文編號(hào)：821552