本文關(guān)鍵詞：雞MTNR1A基因啟動子克隆及活性分析

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【摘要】：MTNR1A基因編碼褪黑激素受體1A,是影響雞產(chǎn)蛋性狀的候選基因。通過對MTNR1A基因啟動子區(qū)的功能分析,有助于從分子水平上了解MTNR1A基因可能的調(diào)控序列及轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制,對進一步了解褪黑激素參與生殖調(diào)控的作用機制也有一定作用。本試驗以海蘭褐殼蛋雞為研究對象,采用PCR方法擴增了雞MTNR1A基因5’調(diào)控區(qū)3134bp到205bp長度不同、下游引物相同的七個片段,對其進行克隆、測序后,構(gòu)建了七個啟動子報告基因表達載體,瞬時轉(zhuǎn)染雞卵泡膜細(xì)胞,應(yīng)用雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)測定了熒光素酶相對活性,并對產(chǎn)生作用的區(qū)段進行生物信息學(xué)分析。同時,PCR擴增31只雞MTNR1A基因5’調(diào)控區(qū)-941~+107區(qū)域進行測序,尋找其SNP位點,對SNP位點進行遺傳學(xué)分析,并對突變前后基因序列進行生物信息學(xué)分析。結(jié)果表明:(1)-243~-39區(qū)段能表達MTNR1A基因啟動子的基本活性。生物信息學(xué)分析表明,該區(qū)域包含TATA box、CCAAT box等典型的核心啟動子元件。表明-243~-39區(qū)段對該基因的表達調(diào)控起重要作用。(2)啟動子分析載體由-553~-39刪除至-243~-39時,熒光素酶活性顯著下降,表明-553~-243間有增強MTNR1A基因表達的作用元件。該區(qū)域存在多個SP1結(jié)合位點和USF結(jié)合位點,推測這兩種結(jié)合位點對-553~-243區(qū)域活性增強起重要作用。(3)啟動子分析載體由-1963~-39刪除至-1525~-39時,熒光素酶結(jié)果顯著升高,表明-1963~-1525間有降低MTNR1A基因表達的作用元件。推測該區(qū)域的AP-1結(jié)合位點、HNF-1結(jié)合位點、USF結(jié)合位點及Arnt反式作用因子發(fā)揮降低啟動子活性的作用。(4)啟動子分析載體由-2373~-39刪除至-1963~-39時,熒光素酶活性顯著降低,表明從-2373~-1963區(qū)域中存在增強MTNR1A基因表達的作用元件。推測該區(qū)域的TATA box、AP-1結(jié)合位點、c-Myb結(jié)合位點、USF結(jié)合位點和Oct-1反式作用因子起到增強-2373~-1963區(qū)域活性的作用。(5)啟動子-941~+107區(qū)域存在6個SNPs位點:-34(C→T),-100(T→G),-110(T→C),-126(C→T),-151(G→A),-538(T→G),處于Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)。其中2個突變可能造成轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點的改變。綜上所述,本試驗證明MTNR1A基因-553~-243和-2373~-1525區(qū)段是調(diào)控該基因表達的重要作用區(qū)段;5’調(diào)控區(qū)-941~+107存在2個突變可能造成轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點的改變。
【關(guān)鍵詞】：雞 MTNR1A基因 啟動子 SNPs
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S831
【目錄】：

• 符號說明4-7
• 中文摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 1 引言11-21
• 1.1 啟動子及其研究方法11-13
• 1.1.1 啟動子概述11
• 1.1.2 啟動子構(gòu)成11-12
• 1.1.3 啟動子活性檢測和功能分析12-13
• 1.2 褪黑激素及受體的研究進展13-17
• 1.2.1 褪黑激素的發(fā)現(xiàn)、結(jié)構(gòu)及分布13-14
• 1.2.2 褪黑激素的合成及對生殖的調(diào)控14-15
• 1.2.3 褪黑激素受體的發(fā)現(xiàn)及分類15-16
• 1.2.4 褪黑激素受體 1A的結(jié)構(gòu)與功能16-17
• 1.3 褪黑激素受體 1A基因的研究進展17-20
• 1.3.1 褪黑激素受體 1A基因的結(jié)構(gòu)17
• 1.3.2 褪黑激素受體 1A基因的表達17
• 1.3.3 褪黑激素受體 1A基因SNP研究及檢測方法17-19
• 1.3.4 褪黑激素受體 1A基因在卵巢中的研究19-20
• 1.4 目的與意義20-21
• 2 材料與方法21-34
• 2.1 試驗材料21-23
• 2.1.1 試驗動物和樣品采集21
• 2.1.2 主要儀器設(shè)備21
• 2.1.3 主要試劑及來源21-22
• 2.1.4 主要數(shù)據(jù)庫和分析軟件22
• 2.1.5 常用試劑的配制22-23
• 2.2 試驗方法23-34
• 2.2.1 雞血液基因組DNA提取23-24
• 2.2.2 MTNR1A 5’調(diào)控區(qū)啟動功能分析24-32
• 2.2.2.1 啟動子預(yù)測及啟動子區(qū)缺失片段PCR擴增24-26
• 2.2.2.2 PCR產(chǎn)物檢測及純化回收26-27
• 2.2.2.4 連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞27-28
• 2.2.2.5 菌液陽性鑒定及質(zhì)粒DNA提取28-29
• 2.2.2.6 重組質(zhì)粒的酶切鑒定及測序29
• 2.2.2.7 無內(nèi)毒素質(zhì)粒大提29-30
• 2.2.2.8 提取質(zhì)粒濃度及質(zhì)量檢測30
• 2.2.2.9 雞卵泡外膜細(xì)胞的分離培養(yǎng)30-31
• 2.2.2.10 質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染試驗31-32
• 2.2.2.11 雙熒光素酶活性測定32
• 2.2.3 MTNR1A基因 5’調(diào)控區(qū)SNPs檢測32-33
• 2.2.3.1 MTNR1A基因 5’調(diào)控區(qū)引物設(shè)計32-33
• 2.2.3.2 MTNR1A基因 5’調(diào)控區(qū)SNPs檢測33
• 2.2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析33-34
• 3 試驗結(jié)果與分析34-43
• 3.1 MTNR1A啟動子區(qū)啟動活性檢測結(jié)果與分析34-41
• 3.1.1 調(diào)控區(qū)域轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點的預(yù)測34-35
• 3.1.2 啟動子不同長度片段的PCR擴增35-36
• 3.1.3 啟動子區(qū)片段報告基因分析載體的構(gòu)建及檢測36-37
• 3.1.4 雞MTNR1A基因啟動子區(qū)片段熒光素酶活性檢測結(jié)果37-39
• 3.1.5 雞MTNR1A基因啟動子的生物信息學(xué)分析39-41
• 3.2 海蘭褐殼蛋雞MTNR1A基因 5’調(diào)控區(qū)SNPS檢測及分析41-43
• 3.2.1 海蘭褐殼蛋雞MTNR1A基因 5’調(diào)控區(qū)SNPs檢測結(jié)果41-42
• 3.2.2 SNPs位點的TFSEARCH分析42
• 3.2.3 MTNR1A基因 5’調(diào)控區(qū)SNPs位點群體遺傳學(xué)分析42-43
• 4 討論43-46
• 4.1 雞MTNR1A啟動子區(qū)啟動功能分析43-44
• 4.2 雞MTNR1A 5’調(diào)控區(qū)SNPS研究44-46
• 5 結(jié)論46-47
• 參考文獻47-56
• 致謝56

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5 王瑩;韓烈保;曾會明;;高等植物啟動子克隆方法的研究進展[J];生物技術(shù)通報;2007年03期

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7 趙曼;陳寧博;杜芳;馬云;;家畜基因啟動子調(diào)控功能的研究進展[J];家畜生態(tài)學(xué)報;2012年06期

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10 孔維文;程嘉;李斌;駱中正;吳飛;劉愛新;;植物受病原物誘導(dǎo)啟動子概述[J];植物保護學(xué)報;2014年02期

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1 劉燕;熊承良;;uPA基因啟動子的研究與展望[A];湖北省性學(xué)會第二屆第二次學(xué)術(shù)年會論文集[C];2005年

2 李桂英;孫紅光;朱迅;杜柏榕;;以綠色熒光蛋白為報告蛋白檢測真核表達載體pcDNA3.1PLN中L-plastin啟動子的活性[A];中國的遺傳學(xué)研究——中國遺傳學(xué)會第七次代表大會暨學(xué)術(shù)討論會論文摘要匯編[C];2003年

3 黃蕤;馬曉娟;李素平;牟達;曾浩;匡安仁;;Survivin啟動子特異性調(diào)控hNIS基因表達介導(dǎo)~(131)I和~(99m)TcO_4~-對腫瘤治療和顯像[A];第四屆全國中青年核醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2008年

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1 張中橋;FAS啟動子 腫瘤細(xì)胞的探測器[N];健康報;2007年

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7 周文波;PUB19啟動子的結(jié)構(gòu)分析及其應(yīng)用研究[D];西南科技大學(xué);2015年

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