本文關(guān)鍵詞：雞MTNR1A基因啟動(dòng)子克隆及活性分析

  更多相關(guān)文章： 雞 MTNR1A基因 啟動(dòng)子 SNPs

【摘要】：MTNR1A基因編碼褪黑激素受體1A,是影響雞產(chǎn)蛋性狀的候選基因。通過對(duì)MTNR1A基因啟動(dòng)子區(qū)的功能分析,有助于從分子水平上了解MTNR1A基因可能的調(diào)控序列及轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制,對(duì)進(jìn)一步了解褪黑激素參與生殖調(diào)控的作用機(jī)制也有一定作用。本試驗(yàn)以海蘭褐殼蛋雞為研究對(duì)象,采用PCR方法擴(kuò)增了雞MTNR1A基因5’調(diào)控區(qū)3134bp到205bp長度不同、下游引物相同的七個(gè)片段,對(duì)其進(jìn)行克隆、測(cè)序后,構(gòu)建了七個(gè)啟動(dòng)子報(bào)告基因表達(dá)載體,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染雞卵泡膜細(xì)胞,應(yīng)用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定了熒光素酶相對(duì)活性,并對(duì)產(chǎn)生作用的區(qū)段進(jìn)行生物信息學(xué)分析。同時(shí),PCR擴(kuò)增31只雞MTNR1A基因5’調(diào)控區(qū)-941~+107區(qū)域進(jìn)行測(cè)序,尋找其SNP位點(diǎn),對(duì)SNP位點(diǎn)進(jìn)行遺傳學(xué)分析,并對(duì)突變前后基因序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析。結(jié)果表明:(1)-243~-39區(qū)段能表達(dá)MTNR1A基因啟動(dòng)子的基本活性。生物信息學(xué)分析表明,該區(qū)域包含TATA box、CCAAT box等典型的核心啟動(dòng)子元件。表明-243~-39區(qū)段對(duì)該基因的表達(dá)調(diào)控起重要作用。(2)啟動(dòng)子分析載體由-553~-39刪除至-243~-39時(shí),熒光素酶活性顯著下降,表明-553~-243間有增強(qiáng)MTNR1A基因表達(dá)的作用元件。該區(qū)域存在多個(gè)SP1結(jié)合位點(diǎn)和USF結(jié)合位點(diǎn),推測(cè)這兩種結(jié)合位點(diǎn)對(duì)-553~-243區(qū)域活性增強(qiáng)起重要作用。(3)啟動(dòng)子分析載體由-1963~-39刪除至-1525~-39時(shí),熒光素酶結(jié)果顯著升高,表明-1963~-1525間有降低MTNR1A基因表達(dá)的作用元件。推測(cè)該區(qū)域的AP-1結(jié)合位點(diǎn)、HNF-1結(jié)合位點(diǎn)、USF結(jié)合位點(diǎn)及Arnt反式作用因子發(fā)揮降低啟動(dòng)子活性的作用。(4)啟動(dòng)子分析載體由-2373~-39刪除至-1963~-39時(shí),熒光素酶活性顯著降低,表明從-2373~-1963區(qū)域中存在增強(qiáng)MTNR1A基因表達(dá)的作用元件。推測(cè)該區(qū)域的TATA box、AP-1結(jié)合位點(diǎn)、c-Myb結(jié)合位點(diǎn)、USF結(jié)合位點(diǎn)和Oct-1反式作用因子起到增強(qiáng)-2373~-1963區(qū)域活性的作用。(5)啟動(dòng)子-941~+107區(qū)域存在6個(gè)SNPs位點(diǎn):-34(C→T),-100(T→G),-110(T→C),-126(C→T),-151(G→A),-538(T→G),處于Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)。其中2個(gè)突變可能造成轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)的改變。綜上所述,本試驗(yàn)證明MTNR1A基因-553~-243和-2373~-1525區(qū)段是調(diào)控該基因表達(dá)的重要作用區(qū)段;5’調(diào)控區(qū)-941~+107存在2個(gè)突變可能造成轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)的改變。
【關(guān)鍵詞】：雞 MTNR1A基因 啟動(dòng)子 SNPs
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S831
【目錄】：

• 符號(hào)說明4-7
• 中文摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 1 引言11-21
• 1.1 啟動(dòng)子及其研究方法11-13
• 1.1.1 啟動(dòng)子概述11
• 1.1.2 啟動(dòng)子構(gòu)成11-12
• 1.1.3 啟動(dòng)子活性檢測(cè)和功能分析12-13
• 1.2 褪黑激素及受體的研究進(jìn)展13-17
• 1.2.1 褪黑激素的發(fā)現(xiàn)、結(jié)構(gòu)及分布13-14
• 1.2.2 褪黑激素的合成及對(duì)生殖的調(diào)控14-15
• 1.2.3 褪黑激素受體的發(fā)現(xiàn)及分類15-16
• 1.2.4 褪黑激素受體 1A的結(jié)構(gòu)與功能16-17
• 1.3 褪黑激素受體 1A基因的研究進(jìn)展17-20
• 1.3.1 褪黑激素受體 1A基因的結(jié)構(gòu)17
• 1.3.2 褪黑激素受體 1A基因的表達(dá)17
• 1.3.3 褪黑激素受體 1A基因SNP研究及檢測(cè)方法17-19
• 1.3.4 褪黑激素受體 1A基因在卵巢中的研究19-20
• 1.4 目的與意義20-21
• 2 材料與方法21-34
• 2.1 試驗(yàn)材料21-23
• 2.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物和樣品采集21
• 2.1.2 主要儀器設(shè)備21
• 2.1.3 主要試劑及來源21-22
• 2.1.4 主要數(shù)據(jù)庫和分析軟件22
• 2.1.5 常用試劑的配制22-23
• 2.2 試驗(yàn)方法23-34
• 2.2.1 雞血液基因組DNA提取23-24
• 2.2.2 MTNR1A 5’調(diào)控區(qū)啟動(dòng)功能分析24-32
• 2.2.2.1 啟動(dòng)子預(yù)測(cè)及啟動(dòng)子區(qū)缺失片段PCR擴(kuò)增24-26
• 2.2.2.2 PCR產(chǎn)物檢測(cè)及純化回收26-27
• 2.2.2.4 連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞27-28
• 2.2.2.5 菌液陽性鑒定及質(zhì)粒DNA提取28-29
• 2.2.2.6 重組質(zhì)粒的酶切鑒定及測(cè)序29
• 2.2.2.7 無內(nèi)毒素質(zhì)粒大提29-30
• 2.2.2.8 提取質(zhì)粒濃度及質(zhì)量檢測(cè)30
• 2.2.2.9 雞卵泡外膜細(xì)胞的分離培養(yǎng)30-31
• 2.2.2.10 質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染試驗(yàn)31-32
• 2.2.2.11 雙熒光素酶活性測(cè)定32
• 2.2.3 MTNR1A基因 5’調(diào)控區(qū)SNPs檢測(cè)32-33
• 2.2.3.1 MTNR1A基因 5’調(diào)控區(qū)引物設(shè)計(jì)32-33
• 2.2.3.2 MTNR1A基因 5’調(diào)控區(qū)SNPs檢測(cè)33
• 2.2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析33-34
• 3 試驗(yàn)結(jié)果與分析34-43
• 3.1 MTNR1A啟動(dòng)子區(qū)啟動(dòng)活性檢測(cè)結(jié)果與分析34-41
• 3.1.1 調(diào)控區(qū)域轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)的預(yù)測(cè)34-35
• 3.1.2 啟動(dòng)子不同長度片段的PCR擴(kuò)增35-36
• 3.1.3 啟動(dòng)子區(qū)片段報(bào)告基因分析載體的構(gòu)建及檢測(cè)36-37
• 3.1.4 雞MTNR1A基因啟動(dòng)子區(qū)片段熒光素酶活性檢測(cè)結(jié)果37-39
• 3.1.5 雞MTNR1A基因啟動(dòng)子的生物信息學(xué)分析39-41
• 3.2 海蘭褐殼蛋雞MTNR1A基因 5’調(diào)控區(qū)SNPS檢測(cè)及分析41-43
• 3.2.1 海蘭褐殼蛋雞MTNR1A基因 5’調(diào)控區(qū)SNPs檢測(cè)結(jié)果41-42
• 3.2.2 SNPs位點(diǎn)的TFSEARCH分析42
• 3.2.3 MTNR1A基因 5’調(diào)控區(qū)SNPs位點(diǎn)群體遺傳學(xué)分析42-43
• 4 討論43-46
• 4.1 雞MTNR1A啟動(dòng)子區(qū)啟動(dòng)功能分析43-44
• 4.2 雞MTNR1A 5’調(diào)控區(qū)SNPS研究44-46
• 5 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-56
• 致謝56

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉正偉;李慧敏;黃妙容;郭凱;王建麗;李延鵬;陳瑞愛;;不同啟動(dòng)子表達(dá)載體的構(gòu)建及其體外活性分析[J];中國畜牧獸醫(yī);2014年02期

2 蔣淑麗;李濤;;植物啟動(dòng)子及相關(guān)功能研究概述[J];陜西農(nóng)業(yè)科學(xué);2012年05期

3 張龍;黃真池;歐陽樂軍;朱苗;陳信波;曾富華;;植物人工啟動(dòng)子研究進(jìn)展[J];廣東農(nóng)業(yè)科學(xué);2014年06期

4 夏江東;程在全;吳渝生;季鵬章;;高等植物啟動(dòng)子功能和結(jié)構(gòu)研究進(jìn)展[J];云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2006年01期

5 王瑩;韓烈保;曾會(huì)明;;高等植物啟動(dòng)子克隆方法的研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)通報(bào);2007年03期

6 李妹芳;馮海霞;郭尚敬;;植物熱激蛋白啟動(dòng)子的特點(diǎn)及應(yīng)用[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2008年29期

7 趙曼;陳寧博;杜芳;馬云;;家畜基因啟動(dòng)子調(diào)控功能的研究進(jìn)展[J];家畜生態(tài)學(xué)報(bào);2012年06期

8 徐超;楊悅寧;王吟;張夢(mèng)晗;謝偉紅;楊維東;劉潔生;李宏業(yè);;綠豆種子8S球蛋白基因啟動(dòng)子的克隆及分析[J];西北植物學(xué)報(bào);2011年02期

9 鄭少緣;范燕萍;;花器官特異啟動(dòng)子的研究進(jìn)展[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2011年31期

10 孔維文;程嘉;李斌;駱中正;吳飛;劉愛新;;植物受病原物誘導(dǎo)啟動(dòng)子概述[J];植物保護(hù)學(xué)報(bào);2014年02期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 劉燕;熊承良;;uPA基因啟動(dòng)子的研究與展望[A];湖北省性學(xué)會(huì)第二屆第二次學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2005年

2 李桂英;孫紅光;朱迅;杜柏榕;;以綠色熒光蛋白為報(bào)告蛋白檢測(cè)真核表達(dá)載體pcDNA3.1PLN中L-plastin啟動(dòng)子的活性[A];中國的遺傳學(xué)研究——中國遺傳學(xué)會(huì)第七次代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要匯編[C];2003年

3 黃蕤;馬曉娟;李素平;牟達(dá);曾浩;匡安仁;;Survivin啟動(dòng)子特異性調(diào)控hNIS基因表達(dá)介導(dǎo)~(131)I和~(99m)TcO_4~-對(duì)腫瘤治療和顯像[A];第四屆全國中青年核醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張中橋;FAS啟動(dòng)子 腫瘤細(xì)胞的探測(cè)器[N];健康報(bào);2007年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳莉;大豆根系特異啟動(dòng)子GmPRP2p和GmTIPp的克隆及表達(dá)特性分析[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2014年

2 馬卉;水稻PHD-finger家族低溫誘導(dǎo)基因的鑒定與啟動(dòng)子功能分析[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

3 葉榮建;水稻組織特異表達(dá)啟動(dòng)子的分離克隆、功能分析及應(yīng)用[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

4 左永春;基于多類特征融合的基因啟動(dòng)子相關(guān)問題的理論研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2011年

5 楊青杰;黃龍膽類胡蘿卜素生物合成基因啟動(dòng)子的功能分析[D];東北師范大學(xué);2013年

6 王衛(wèi)東;缺氧/輻射雙敏感性啟動(dòng)子的構(gòu)建與肺癌放射—基因治療實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2003年

7 湯紹輝;人肝癌胰島素樣生長因子Ⅱ基因啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)與功能研究[D];暨南大學(xué);2004年

8 彭楠;硫化葉菌阿拉伯糖啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄調(diào)控及其應(yīng)用[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

9 蔡萌;病原誘導(dǎo)啟動(dòng)子和組織特異性啟動(dòng)子的分離克隆和功能鑒定[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

10 熊杰;新型嵌合啟動(dòng)子在腫瘤治療中的應(yīng)用[D];武漢大學(xué);2010年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 何丹丹;病原物誘導(dǎo)啟動(dòng)子GST1響應(yīng)柑橘潰瘍病誘導(dǎo)的功能結(jié)構(gòu)域研究[D];西南大學(xué);2015年

2 敬帆;蠟梅CpAGL6基因啟動(dòng)子的克隆及功能的初步分析[D];西南大學(xué);2015年

3 趙小琴;三個(gè)油菜種子特異表達(dá)啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)和功能比較研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

4 鄧恩澤;基于序列物理化學(xué)特征的啟動(dòng)子預(yù)測(cè)研究[D];電子科技大學(xué);2015年

5 曾小紅;花生果皮豐富表達(dá)基因及其啟動(dòng)子的克隆與分析[D];福建農(nóng)林大學(xué);2012年

6 胡倩;牛α-actin基因啟動(dòng)子的改造及其功能驗(yàn)證[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

7 周文波;PUB19啟動(dòng)子的結(jié)構(gòu)分析及其應(yīng)用研究[D];西南科技大學(xué);2015年

8 王芳;棉花種子特異表達(dá)的α球蛋白A基因啟動(dòng)子的表達(dá)分析[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

9 李楠楠;黃瓜CsFBXL基因啟動(dòng)子的克隆及黃瓜生長發(fā)育中實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析內(nèi)參基因篩選[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

10 胡艷平;木薯細(xì)胞壁酸性轉(zhuǎn)化酶基因MeCWINV1啟動(dòng)子的克隆與功能分析[D];海南大學(xué);2014年

，

本文編號(hào)：818484