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HBV病毒S基因及C基因突變研究

發(fā)布時(shí)間:2017-09-09 04:45

  本文關(guān)鍵詞:HBV病毒S基因及C基因突變研究


  更多相關(guān)文章: 乙型肝炎病毒 疫苗保護(hù)失敗 兒童病例 病毒變異


【摘要】:目的:研究乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)疫苗免疫保護(hù)失敗的兒童患者體內(nèi)病毒表面抗原基因(Surface gene),其a決定簇(a determinant)和主要親水區(qū)(Major Hydrophilic Region,MHR)區(qū)段的變異情況,并結(jié)合與未接種疫苗的兒童患者體內(nèi)病毒表面抗原及基因a決定簇和主要親水區(qū)段的變異情況,比較不同組別之間的突變差異。方法:收集重慶地區(qū)乙型肝炎病毒疫苗免疫保護(hù)失敗患兒(243例)及未接種疫苗的乙型肝炎病毒感染患兒(20例)血清樣本,從樣本血清中提取HBV病毒DNA,用巢氏PCR方法擴(kuò)增HBV病毒的S基因區(qū)段,利用Sanger測(cè)序,得到不同患者體內(nèi)的HBV S基因序列,利用HBV分型工具對(duì)所得序列進(jìn)行基因型分析,然后將序列與相應(yīng)基因型的標(biāo)準(zhǔn)序列進(jìn)行比對(duì)分析,分析不同組中各位點(diǎn)的突變情況。結(jié)果:243例免疫保護(hù)失敗患兒體內(nèi)病毒a決定簇突變檢出率顯著高于20例未經(jīng)疫苗免疫組患兒(31.7%vs 10%,P=0.044);免疫失敗組兒童體內(nèi)病毒MHR突變率數(shù)值也高于未接種組兒童,在統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異不顯著(49.8%vs 30%,P=0.106)。在疫苗免疫保護(hù)失敗兒童組中,a決定簇和MHR區(qū)段的核苷酸突變的發(fā)生與病毒低水平復(fù)制顯著相關(guān):與各基因型野生型相比,突變組兒童的DNA滴度顯著低于野生表型組兒童(log10 6.9±1.8 vs log10 7.7±1.8,P=0.000;log10 7.1±1.6 vs log10 7.6±1.9,P=0.000)。免疫失敗兒童病例中,MHR突變組兒童谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)數(shù)值也顯著高于未突變組(67.1±58.8 vs 56.5±51.8,P=0.018)。在243例疫苗免疫保護(hù)失敗兒童體內(nèi)病毒MHR區(qū)域中共檢出145個(gè)變異氨基酸,熱點(diǎn)變異類型主要包括I110L(6例)、K122R(15例)、T126A(18例)、I126T(14例)、M133L(7例)、G145R(6例)及Y161F(12例)等。進(jìn)一步分析各類型突變與臨床表型間差異,發(fā)現(xiàn)含G145R及Y161F突變病例體內(nèi)血清病毒DNA水平顯著低于無突變組(log106.8±1.1 vs log10 7.5±1.8,P=0.048;log10 5.0±2.6 vs log10 7.3±1.8,P=0.000)。結(jié)論:疫苗免疫保護(hù)失敗兒童病例體內(nèi)病毒a決定簇及MHR具有較高的突變率,且該區(qū)段的突變與病毒較低的復(fù)制水平及及較高的ALT相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】:乙型肝炎病毒 疫苗保護(hù)失敗 兒童病例 病毒變異
【學(xué)位授予單位】:重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2016
【分類號(hào)】:R725.1
【目錄】:
  • 英漢縮略語名詞對(duì)照5-6
  • 中文摘要6-8
  • 英文摘要8-10
  • 前言10-11
  • 第一部分 重慶地區(qū)乙肝疫苗免疫無效兒童病毒基因組表面抗原區(qū)變異研究11-25
  • 1 材料與儀器11-12
  • 1.1 實(shí)驗(yàn)研究病例對(duì)象的收集11
  • 1.2 主要儀器設(shè)備及試劑11-12
  • 2 方法12-16
  • 2.1 樣品的收集與處理12
  • 2.2 HBV血清標(biāo)志物、ALT及DNA載量檢測(cè)12-13
  • 2.3 樣本血清中HBV DNA的提取13
  • 2.4 HBV S基因區(qū)序列的擴(kuò)增13-14
  • 2.5 HBV S基因區(qū)序列測(cè)定14
  • 2.6 測(cè)序結(jié)果數(shù)據(jù)分析14-16
  • 3 結(jié)果16-21
  • 3.1 慢性HBV感染患者基本臨床資料16-17
  • 3.2 HBV S基因區(qū)突變分析17-18
  • 3.3 MHR熱點(diǎn)突變氨基酸位點(diǎn)及突變類型18-19
  • 3.4 MHR及a決定簇氨基酸突變與臨床資料間相關(guān)性分析19-21
  • 4 討論21-22
  • 小結(jié)22-23
  • 參考文獻(xiàn)23-25
  • 第二部分 兒童與成人慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒Core基因區(qū)準(zhǔn)種特征及正選擇壓力差異分析25-41
  • 1 材料25-26
  • 1.1 數(shù)據(jù)材料來源25
  • 1.2 主要儀器設(shè)備及試劑25-26
  • 2 方法26-30
  • 2.1 樣品的收集與處理26
  • 2.2 HBV血清標(biāo)志物、ALT及DNA載量檢測(cè)26
  • 2.3 樣本血清中HBV DNA的提取26-27
  • 2.4 巢氏PCR擴(kuò)增HBV C基因區(qū)27-28
  • 2.5 HBV C基因區(qū)序列測(cè)定28
  • 2.6 HBV基因分型28
  • 2.7 測(cè)序結(jié)果比對(duì)分析28-30
  • 3 結(jié)果30-35
  • 3.1 慢性HBV感染患者基本臨床資料30-31
  • 3.2 兒童和成人HBV慢性感染病例Core基因區(qū)異質(zhì)性分析31-32
  • 3.3 不同病例群體體內(nèi)病毒Core基因區(qū)正選擇位點(diǎn)統(tǒng)計(jì)32-34
  • 3.4 不同病人群體體內(nèi)HBV Core基因區(qū)正選擇位點(diǎn)免疫表位特性分析34-35
  • 4 討論35-37
  • 小結(jié)37-38
  • 參考文獻(xiàn)38-41
  • 文獻(xiàn)綜述41-45
  • 參考文獻(xiàn)43-45
  • 致謝45-46
  • 攻讀學(xué)位期間撰寫和發(fā)表的論文46

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本文編號(hào):818380

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