本文關(guān)鍵詞：人二硫鍵氧化還原酶類似蛋白基因啟動(dòng)子克隆和上游抑制元件分析

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【摘要】：目的克隆Dsb A-L基因啟動(dòng)子,并對(duì)其活性進(jìn)行初步分析。方法以人基因組DNA為模板,利用PCR技術(shù)擴(kuò)增Dsb A-L基因5'端2115bp片段(從翻譯起始點(diǎn)ATG上游-2128~-14區(qū)域)。將PCR產(chǎn)物插入熒光素酶報(bào)告基因載體p GL3-basic。隨后,構(gòu)建5'端系列缺失的報(bào)告基因質(zhì)粒。將構(gòu)建的一系列質(zhì)粒轉(zhuǎn)染3T3-L1和HEK 293細(xì)胞,檢測(cè)熒光素酶活性。利用在線軟件MAPPER預(yù)測(cè)轉(zhuǎn)錄調(diào)控關(guān)鍵序列潛在的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)。通過Real-time PCR比較這些轉(zhuǎn)錄因子在肥胖和正常人脂肪組織中的表達(dá)。結(jié)果成功構(gòu)建人Dsb A-L啟動(dòng)子報(bào)告基因質(zhì)粒。系列缺失分析表明-2128~-1302區(qū)域是影響轉(zhuǎn)錄活性的關(guān)鍵序列。MAPPER軟件預(yù)測(cè)此區(qū)域可能與一些轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合。比較這些轉(zhuǎn)錄因子在肥胖患者和正常人脂肪組織中的表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)其中NF-κB和FOXO1在肥胖患者中表達(dá)顯著增加,進(jìn)一步推測(cè)NF-κB和FOXO1可能是人Dsb A-L基因啟動(dòng)子上游的調(diào)控抑制因子。結(jié)論成功構(gòu)建人Dsb A-L基因啟動(dòng)子系列缺失質(zhì)粒,初步分析了其上游可能存在的關(guān)鍵調(diào)控元件,為進(jìn)一步的轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 上海交通大學(xué)附屬第六人民醫(yī)院內(nèi)分泌代謝科、上海市糖尿病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室、上海市糖尿病研究所、上海市糖尿病臨床醫(yī)學(xué)中心;
【關(guān)鍵詞】： 二硫鍵氧化還原酶類似蛋白 轉(zhuǎn)錄調(diào)控 啟動(dòng)子
【基金】：上海市自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(15ZR1431700)
【分類號(hào)】：R440
【正文快照】： 二硫鍵氧化還原酶類似蛋白(disulfide-bond-A oxidoreductase-like protein,Dsb A-L)是近年發(fā)現(xiàn)的一種與脂聯(lián)素多聚體形成有關(guān)的重要調(diào)節(jié)蛋白,在促進(jìn)脂聯(lián)素的多聚化,增加胰島素的敏感性和增加能量代謝方面具有很多有益的作用[1]。Dsb A-L的表達(dá)水平和肥胖呈負(fù)相關(guān),但是其調(diào)節(jié)

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