發(fā)布時(shí)間：2017-09-06 00:21

  本文關(guān)鍵詞：大腸桿菌CFT073中Curli系統(tǒng)重要基因csgF的克隆、表達(dá)、純化和結(jié)構(gòu)分析

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【摘要】：【目的】對(duì)大腸桿菌CFT073中Culri系統(tǒng)的重要蛋白CsgF進(jìn)行高效表達(dá),探索其純化條件和三維結(jié)構(gòu),為研究Curli生物合成機(jī)制提供理論基礎(chǔ)�！痉椒ā恳源竽c桿菌CFT073基因組為模板擴(kuò)增csgF基因,構(gòu)建pET28a-csg F(nsp)-N-6His、pET28a-csg F(20-129)-N-6His、pET28a-csg F-C-6His和p ET28a-csg F(nsp)-C-6His等重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化到大腸桿菌DH5α并在BL21(DE3)中誘導(dǎo)表達(dá);通過(guò)十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定CsgF蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)情況,用Ni-NTA His Bind Resin和凝膠排阻層析色譜純化重組蛋白CsgF,SDS-PAGE和Western blotting方法鑒定分析;用Pull down實(shí)驗(yàn)研究CsgF與CsgG蛋白的相互作用,同源模建方法分析重組蛋白CsgF的三級(jí)結(jié)構(gòu)�！窘Y(jié)果】克隆了目的基因csg F,并篩選出穩(wěn)定CsgF蛋白的條件:50 mmol/L Sodium acetate(pH 5.0)、150 mmol/L NaCl、5%Glyercol;CsgF與CsgG存在相互作用,CsgF三維結(jié)構(gòu)模型顯示為(β/α)�！窘Y(jié)論】獲得了高純度穩(wěn)定的CsgF重組蛋白及其三維結(jié)構(gòu),為進(jìn)一步研究CsgF結(jié)構(gòu)與功能奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟(jì)林育種與栽培國(guó)家林業(yè)局重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;中南林業(yè)科技大學(xué)湖南省經(jīng)濟(jì)林培育與利用協(xié)同創(chuàng)新中心;中國(guó)科學(xué)院生物物理研究所;
【關(guān)鍵詞】： 大腸桿菌CFT CsgF 基因克隆 蛋白質(zhì)表達(dá)純化 凝膠排阻層析色譜
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.31570682)~~
【分類號(hào)】：Q78
【正文快照】： 淀粉樣蛋白纖維(Amyloids)是一類錯(cuò)誤折疊引發(fā)疾病的蛋白聚集體。近年來(lái)人們?cè)诩?xì)菌、真菌、蛛形綱動(dòng)物、魚(yú)和哺乳動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)了功能淀粉樣蛋白纖維[1-6]。Curli是一種典型的功能淀粉樣纖維,它是大腸桿菌(Escherichia coli)和沙門氏菌(Salmonella spp.)中表達(dá)產(chǎn)生的一類附著在細(xì)

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 胡鋼清;朱懷球;;致病性大腸桿菌CFT073菌株基因組的再注釋[A];中國(guó)生物醫(yī)學(xué)工程進(jìn)展——2007中國(guó)生物醫(yī)學(xué)工程聯(lián)合學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（下冊(cè)）[C];2007年

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本文編號(hào)：801069