本文關(guān)鍵詞：毛竹阿拉伯糖-5-磷酸異構(gòu)酶的基因克隆、原核表達(dá)及純化

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【摘要】：毛竹Phyllostachys edulis阿拉伯糖-5-磷酸異構(gòu)酶(Pe Kds D)是2-酮-3-脫氧辛糖酸(KDO)生物合成途徑的第1個(gè)關(guān)鍵酶。采用逆轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(q RT-PCR)克隆得到毛竹Kds D基因。該基因c DNA全長1 038 bp,編碼346個(gè)氨基酸;對不同物種來源的Kds D氨基酸序列進(jìn)行比對和系統(tǒng)進(jìn)化樹分析。結(jié)果表明:毛竹的Kds D與玉米Zea mays等植物來源的Kds D有很高的序列一致性,而與微生物來源的Kds D序列一致性較低。毛竹不同組織實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(q RT-PCR)結(jié)果表明:Pe Kds D基因在葉中表達(dá)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他組織。在大腸埃希菌Escherichia coli原核表達(dá)系統(tǒng)中獲得了Kds D的可溶性高表達(dá)蛋白,將大量表達(dá)的重組蛋白經(jīng)過Ni-NTA親和層析和分子篩層析(SEC)進(jìn)行純化,發(fā)現(xiàn)Kds D在溶液(30 mmol·L~(-1)三羥甲基氨基甲烷pH 8.0,200 mmol·L~(-1)氯化鈉)中以多種聚體的形式存在;酶學(xué)性質(zhì)測定的結(jié)果表明:毛竹Kds D酶最適pH值為pH 8.5,最適作用溫度為37℃。此結(jié)果為后期研究植物Kds D蛋白的結(jié)構(gòu)與功能奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 浙江農(nóng)林大學(xué)亞熱帶森林培育國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地;
【關(guān)鍵詞】： 林木育種學(xué) 毛竹 阿拉伯糖--磷酸異構(gòu)酶 基因克隆 原核表達(dá) 蛋白純化
【基金】：浙江省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(Y14C160039)
【分類號】：S795.7
【正文快照】： cloning;prokaryotic expression;protein purification果膠類多糖廣泛分布于高等植物的根、莖、葉、果實(shí)等的細(xì)胞初生壁和細(xì)胞間隙,對細(xì)胞組織起著軟化和黏合作用,同時(shí)還是抵御病原體微生物入侵的天然屏障[1]。2-酮-3-脫氧辛糖酸(KDO)是果膠類多糖鼠李半乳糖醛酸聚糖-Ⅱ(Rham

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：789190