本文關鍵詞：毛竹阿拉伯糖-5-磷酸異構酶的基因克隆、原核表達及純化

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【摘要】：毛竹Phyllostachys edulis阿拉伯糖-5-磷酸異構酶(Pe Kds D)是2-酮-3-脫氧辛糖酸(KDO)生物合成途徑的第1個關鍵酶。采用逆轉錄實時聚合酶鏈式反應(q RT-PCR)克隆得到毛竹Kds D基因。該基因c DNA全長1 038 bp,編碼346個氨基酸;對不同物種來源的Kds D氨基酸序列進行比對和系統(tǒng)進化樹分析。結果表明:毛竹的Kds D與玉米Zea mays等植物來源的Kds D有很高的序列一致性,而與微生物來源的Kds D序列一致性較低。毛竹不同組織實時熒光定量聚合酶鏈式反應(q RT-PCR)結果表明:Pe Kds D基因在葉中表達量遠遠高于其他組織。在大腸埃希菌Escherichia coli原核表達系統(tǒng)中獲得了Kds D的可溶性高表達蛋白,將大量表達的重組蛋白經過Ni-NTA親和層析和分子篩層析(SEC)進行純化,發(fā)現(xiàn)Kds D在溶液(30 mmol·L~(-1)三羥甲基氨基甲烷pH 8.0,200 mmol·L~(-1)氯化鈉)中以多種聚體的形式存在;酶學性質測定的結果表明:毛竹Kds D酶最適pH值為pH 8.5,最適作用溫度為37℃。此結果為后期研究植物Kds D蛋白的結構與功能奠定了基礎。
【作者單位】： 浙江農林大學亞熱帶森林培育國家重點實驗室培育基地;
【關鍵詞】： 林木育種學 毛竹 阿拉伯糖--磷酸異構酶 基因克隆 原核表達 蛋白純化
【基金】：浙江省自然科學基金資助項目(Y14C160039)
【分類號】：S795.7
【正文快照】： cloning;prokaryotic expression;protein purification果膠類多糖廣泛分布于高等植物的根、莖、葉、果實等的細胞初生壁和細胞間隙,對細胞組織起著軟化和黏合作用,同時還是抵御病原體微生物入侵的天然屏障[1]。2-酮-3-脫氧辛糖酸(KDO)是果膠類多糖鼠李半乳糖醛酸聚糖-Ⅱ(Rham

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本文編號：789190