本文關(guān)鍵詞：橘小實蠅nAChR α9亞基基因的鑒定及其時空表達(dá)

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【摘要】：【目的】橘小實蠅Bactrocera dorsalis是世界性分布的危害果蔬的重要檢疫性農(nóng)業(yè)害蟲,目前已對包括新煙堿類在內(nèi)的多種殺蟲劑產(chǎn)生了抗性。本研究在克隆鑒定橘小實蠅煙堿型乙酰膽堿受體(n AChR)α9亞基基因c DNA的基礎(chǔ)上,對其分子特性和系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)行生物信息學(xué)分析,并檢測了該基因在橘小實蠅不同發(fā)育階段及成蟲不同組織中的表達(dá)模式,為進(jìn)一步研究其潛在功能及在抗藥性中的作用奠定基礎(chǔ)�！痉椒ā客ㄟ^高通量測序技術(shù)對橘小實蠅進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序,對高質(zhì)量序列拼接組裝、基因鑒定及同源性比對分析,預(yù)測橘小實蠅煙堿型乙酰膽堿受體候選基因。采用RTPCR和RACE(rapid-amplification of c DNA ends)技術(shù)克隆該基因的c DNA全長序列,利用生物信息學(xué)分析軟件分析其基本生物信息;以α-tubulin為內(nèi)參基因,利用q PCR研究該基因mRNA在橘小實蠅不同發(fā)育階段及成蟲頭、胸、腹等組織中的表達(dá)模式�！窘Y(jié)果】根據(jù)預(yù)測的基因序列,設(shè)計特異性引物進(jìn)行RACE擴(kuò)增,從橘小實蠅中克隆獲得一條煙堿型乙酰膽堿受體基因的全長序列,c DNA全長1 486 bp,完整開放閱讀框1 281 bp,編碼426個氨基酸,推測其蛋白質(zhì)分子量為49.1 k D,理論等電點6.56。該基因經(jīng)序列比對命名為Bdα9,Gen Bank登錄號為JQ178254。氨基酸同源性及系統(tǒng)進(jìn)化樹分析顯示,該基因的編碼蛋白具有n AChRα亞基的典型特征,并與Agα9和Dmβ3聚類在一起,與其他昆蟲n AChRα9亞基具有22%~27%的氨基酸序列一致性。q PCR結(jié)果表明,Bdα9mRNA在橘小實蠅整個發(fā)育階段均有表達(dá),成蟲期的表達(dá)量顯著高于卵、2齡幼蟲、3齡幼蟲和蛹期;Bdα9在橘小實蠅成蟲頭部中表達(dá)量最高,且顯著高于胸部和腹部中的表達(dá)量�！窘Y(jié)論】鑒定了橘小實蠅煙堿型乙酰膽堿受體基因Bdα9,明確了該基因在橘小實蠅不同發(fā)育階段及成蟲不同組織中的表達(dá)模式。根據(jù)q PCR的結(jié)果,推測Bdα9可能在橘小實蠅成蟲期具有重要功能。
【作者單位】： 西南大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院昆蟲學(xué)及害蟲控制工程重慶市市級重點實驗室;貴陽學(xué)院生物與環(huán)境工程學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 橘小實蠅 煙堿型乙酰膽堿受體 基因克隆 序列分析 表達(dá)譜 實時定量PCR
【基金】：中國博士后基金(2013M540693) 重慶市前沿與基礎(chǔ)研究項目(cstc2013jcyj A80020) 重慶市博士后特別資助項目(Xm2014114) 公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(201203038)
【分類號】：S433
【正文快照】： 橘小實蠅Bactrocera dorsalis是一種世界性分布的危害果蔬的實蠅科(Tephritidae)重要農(nóng)業(yè)害蟲,已被多個國家列為檢疫對象。橘小實蠅可危害46科250多種水果和蔬菜。成蟲可刺穿果皮產(chǎn)卵,卵在果肉中孵化主要通過幼蟲取食為害,大大降低了果品的市場價值,給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)

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本文編號：780323