本文關(guān)鍵詞：黑尾葉蟬卵黃原蛋白受體基因cDNA的克隆、序列分析及表達(dá)模式

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【摘要】：【目的】卵黃原蛋白受體(vitellogenin receptor,VgR)屬于低密度脂蛋白受體,通過介導(dǎo)內(nèi)吞作用為發(fā)育中的卵母細(xì)胞攝取卵黃原蛋白,為胚胎發(fā)育提供營養(yǎng)物質(zhì),在昆蟲生殖過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。為研究黑尾葉蟬Nephotettix cincticeps VgR(NcVgR)基因的生理功能及其在生殖中的作用,本研究克隆并解析了NcVgR基因的序列,并對(duì)其時(shí)空表達(dá)進(jìn)行了研究�！痉椒ā扛鶕�(jù)黑尾葉蟬轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)信息,利用RT-PCR克隆了NcVgR基因,并進(jìn)行了生物信息學(xué)分析;利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR研究了不同發(fā)育時(shí)期、成蟲不同組織NcVgR的表達(dá)水平�！窘Y(jié)果】NcVgR c DNA序列全長6 676 bp,開放閱讀框長度5 568 bp,編碼1 855個(gè)氨基酸,預(yù)測編碼蛋白的分子量為206 k D,N端前17個(gè)氨基酸為信號(hào)肽。序列分析顯示,NcVgR具有低密度脂蛋白家族的5個(gè)經(jīng)典保守域,即:配體結(jié)合域(ligand-binding domain,LBD)、表皮生長因子前體同源域(EGF-precursor homology domain,EGFP)、O-糖鏈結(jié)構(gòu)域(O-linked sugar domain,OLSD)、跨膜域(transmembrane domain,TMD)和胞質(zhì)尾域(cytoplasmic domain)。系統(tǒng)發(fā)育分析表明,NcVgR與褐飛虱N.lugens VgR親緣關(guān)系最近。實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示,NcVgR轉(zhuǎn)錄起始時(shí)間為5齡若蟲,羽化后轉(zhuǎn)錄水平逐漸上升,至羽化后8 d達(dá)到峰值,隨后下降。有意思的是,隨著黑尾葉蟬產(chǎn)卵,NcVgR轉(zhuǎn)錄水平再次上升,至羽化后16 d達(dá)到最高水平。組織定位結(jié)果顯示,NcVgR在黑尾葉蟬雌成蟲卵巢中特異性高表達(dá),而在雌成蟲脂肪體和腸道中微量表達(dá),在雌成蟲腦及雄成蟲中均未檢測到表達(dá)。【結(jié)論】NcVgR在黑尾葉蟬雌成蟲卵巢中特異性表達(dá),并且不同發(fā)育時(shí)期具有不同的表達(dá)量,這為研究黑尾葉蟬的生殖調(diào)控機(jī)理提供了分子信息。
【作者單位】： 浙江大學(xué)昆蟲科學(xué)研究所農(nóng)業(yè)部農(nóng)業(yè)昆蟲學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 黑尾葉蟬 卵黃原蛋白受體 基因克隆 序列分析 表達(dá)模式
【基金】：國家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展規(guī)劃(“973”計(jì)劃)項(xiàng)目(2014CB138404)
【分類號(hào)】：Q966
【正文快照】： using RT-PCR according to previous transcriptomic data of N.cincticeps and analyzed by bioinformatic昆蟲卵黃原蛋白受體(vitellogenin receptor,VgR)在雌成蟲成熟卵巢中表達(dá),錨定在生殖細(xì)胞膜表面,在卵子發(fā)生過程中,通過介導(dǎo)內(nèi)吞作用將脂肪體合成、分泌到血淋巴中的卵

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