本文關(guān)鍵詞：內(nèi)含肽介導(dǎo)的天蠶素AD基因工程表達(dá)、其酰胺化及應(yīng)用

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【摘要】：目的設(shè)計(jì)、合成天蠶素AD(CAD)基因序列,與內(nèi)含肽(Intein)融合表達(dá)后通過(guò)重組蛋白自剪切作用獲得C端酰胺化的CAD,并與抗生素配伍使用。方法根據(jù)大腸埃希菌密碼子偏好性對(duì)CAD基因序列進(jìn)行改造,人工合成目的基因,構(gòu)建重組質(zhì)粒pCold-SUMO-CAD-Intein,轉(zhuǎn)化大腸埃希菌,誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白,經(jīng)鎳柱親和層析純化,后用DTT及腸激酶切割,利用分子篩純化獲得酰胺化CAD,并進(jìn)行電泳及質(zhì)譜鑒定。采用微量肉湯法檢測(cè)重組CAD抑菌活性及其與不同抗生素按不同比例配伍使用的抑菌活性。結(jié)果 PCR擴(kuò)增目的基因片段為132bp,與預(yù)期一致。質(zhì)譜顯示表達(dá)的CAD分子質(zhì)量單位為3.949ku,與理論值相符。所得CAD抗菌肽對(duì)常見(jiàn)革蘭陰性菌抗菌力強(qiáng),配伍抗生素使用能發(fā)揮協(xié)同抑菌作用。結(jié)論成功構(gòu)建CAD基因重組質(zhì)粒pCold-SUMO-CAD-Intein,通過(guò)與內(nèi)含肽(Intein)融合表達(dá),經(jīng)分子內(nèi)的自剪切作用直接獲得C末端酰胺化的抗菌肽,與抗生素配伍使用,能顯著降低抗生素用量,具有作為抗生素替代物的應(yīng)用潛力。
【作者單位】： 青島康倫生物科技有限公司;
【關(guān)鍵詞】： 天蠶素AD 表達(dá) 酰胺化 抗生素 配伍
【基金】：科技型中小企業(yè)技術(shù)創(chuàng)新基金項(xiàng)目(No.14C26213712180)
【分類號(hào)】：Q78;R91
【正文快照】： *?**?近年來(lái)傳統(tǒng)抗生素濫用情況日趨嚴(yán)重,抗生素耐藥菌株不斷出現(xiàn),亟待研發(fā)新的安全高效的抗菌藥物�？咕�(antimicrobial peptides)是一種古老而廣泛存在于生物界中的活性多肽,世界上首次被發(fā)現(xiàn)的***抗菌肽為天蠶素(Cecropins),其抗菌譜廣,具有抗多重耐藥菌及真菌的作用。部

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 王振江;;酶的酰胺化作用一步法[J];生物技術(shù)通報(bào);1985年11期

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3 王翔林;C－末端酰胺化酶的研究進(jìn)展[J];生物工程進(jìn)展;1995年01期

4 孫國(guó)鳳;;用20升培養(yǎng)物生產(chǎn)5克降鈣素[J];生物技術(shù)通報(bào);1991年11期

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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 武兵元;大鼠α-酰胺化酶在鏈霉菌中的分泌表達(dá)[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1997年

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本文編號(hào)：764439