本文關(guān)鍵詞：豬腹瀉病毒可視化基因芯片的兩種靶基因標(biāo)記技術(shù)的比較

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【摘要】：本研究同時(shí)采用常規(guī)PCR和不對(duì)稱PCR分別進(jìn)行靶基因片段生物素標(biāo)記,應(yīng)用于金標(biāo)銀染可視化基因芯片,分析其對(duì)豬腹瀉病毒可視化共檢基因芯片雜交效率的影響。分別選取豬流行性腹瀉病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的S和M基因,豬傳染性胃腸炎病毒(transmissible gastroenteritis virus of swine,TGEV)的N和S基因,A型豬輪狀病毒(group A porcine rotavirus,GAR)的VP7和NSP4基因設(shè)計(jì)引物。根據(jù)目的基因片段設(shè)計(jì)60-mer寡核苷酸探針,在其5′端修飾15個(gè)T堿基后,利用芯片點(diǎn)樣儀噴樣于醛基玻片上制成基因芯片。應(yīng)用常規(guī)PCR和不對(duì)稱PCR兩種生物素標(biāo)記方法,對(duì)本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建保存的三種腹瀉病毒的陽性質(zhì)粒進(jìn)行生物素?fù)饺霕?biāo)記,在相同條件下與基因芯片進(jìn)行雜交。利用生物素-鏈霉親和素的特異性鏈接,將鏈霉親和素修飾的納米金顆粒引入反應(yīng)體系,通過銀離子染色后直接眼觀試驗(yàn)結(jié)果。結(jié)果表明,應(yīng)用此可視化共檢芯片特異性好,CSFV、PRRSV、PCV2、JEV雜交結(jié)果均呈陰性。不對(duì)稱PCR標(biāo)記法可有效提高雜交效率,不對(duì)稱PCR標(biāo)記技術(shù)和常規(guī)PCR標(biāo)記技術(shù)的最低檢測(cè)濃度分別為10~5copies/L和10~7copies/L,前者的靈敏性是后者的10~100倍。應(yīng)用不對(duì)稱PCR標(biāo)記技術(shù)對(duì)樣品進(jìn)行生物素標(biāo)記后,可明顯提高腹瀉病毒可視化共檢芯片的雜交效率,有利于檢測(cè)型可視化基因芯片的應(yīng)用。
【作者單位】： 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院豬病研究中心與基因芯片實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 豬病毒性腹瀉 基因芯片 金標(biāo)銀染 常規(guī)PCR 不對(duì)稱PCR 雜交效率
【基金】：公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(xiàng)項(xiàng)目(201203056)
【分類號(hào)】：S852.651
【正文快照】： 豬流行性腹瀉病毒(porcine epidemic diarrheavirus,PEDV)、豬傳染性胃腸炎病毒(transmissiblegastroenteritis virus of swine,TGEV)和A型豬輪狀病毒(group A porcine rotavirus,GAR)是引起仔豬發(fā)生腹瀉的主要病原[1-2]。仔豬病毒性腹瀉病的臨床癥狀主要表現(xiàn)為嚴(yán)重腹瀉、嘔吐

【相似文獻(xiàn)】

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1 謝松e，

本文編號(hào)：764028