本文關(guān)鍵詞：兩個(gè)地區(qū)馬腸胃蠅蛆線粒體基因序列變異研究及線粒體基因組全序列分析

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【摘要】：馬胃蠅蛆病是由馬胃蠅幼蟲寄生于馬屬動(dòng)物消化道內(nèi)而引起的一種慢性消耗性疾病。該病呈世界分布,各地均有流行,國內(nèi)主要流行于東北、西北及內(nèi)蒙等地。馬胃蠅蛆病原有4種蛆,即腸胃蠅(蛆)(Gasterophilus intestinalis)、紅尾胃蠅(G.haemorrhoidalis)、獸胃蠅(G.pecorum)和煩擾胃蠅(G.veterinus),其中腸胃蠅蛆感染率最高且分布最廣。馬胃蠅主要損害宿主的胃腸部分,引起潰瘍、膿腫、糜爛、穿孔和腹膜炎等損傷,進(jìn)而引發(fā)宿主高度貧血、消瘦、免疫系統(tǒng)崩潰,嚴(yán)重感染時(shí)可造成馬匹衰竭死亡,給養(yǎng)馬業(yè)發(fā)展帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失。目前針對馬胃蠅蛆的研究主要集中在傳統(tǒng)的寄生蟲學(xué)研究方面,如形態(tài)學(xué)、生活史以及疾病的流行病學(xué)調(diào)查與診斷等,關(guān)于分子方面的研究還相對較少。因此,本研究第一部分基于線粒體部分基因序列,研究新疆和黑龍江兩個(gè)地區(qū)馬腸胃蠅蛆的遺傳變異情況。應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)分別對采自黑龍江和新疆馬體內(nèi)腸胃蠅蛆線粒體的部分序列進(jìn)行擴(kuò)增,包括細(xì)胞色素c氧化酶亞基(cox1)、核糖體大亞基(rrn L)和NADH脫氫酶亞基5(nad5)。應(yīng)用分子生物學(xué)軟件對所得序列進(jìn)行比對和多態(tài)性分析,結(jié)果顯示cox1,nad5,rrn L三段線粒體基因種內(nèi)的變異分別為0.1-3.1%、0.4-3.4%和0.1-1.2%,種內(nèi)變異最大的基因是nad5,而變異最小的基因是rrn L。馬腸胃蠅蛆與鼻胃蠅蛆(G.nasilis)和黑腹胃蠅蛆(G.pecorum)cox1間的種間差異分別為11.6-17.6%和17.5-18.5%。貝葉斯(BI)法構(gòu)建進(jìn)化樹發(fā)現(xiàn),本研究所有腸胃蠅蛆樣品與其它腸胃蠅蛆聚集在一起并且形成單分支,但來自國內(nèi)同一地域的樣品并未單獨(dú)形成一分支。來自黑龍江和新疆地區(qū)的樣品親緣關(guān)系較國外樣品近。本研究第二部分的內(nèi)容是擴(kuò)增新疆和黑龍江的腸胃蠅蛆線粒體全基因組,對整個(gè)基因組序列進(jìn)行完整測序,運(yùn)用線粒體基因組的蛋白質(zhì)編碼基因構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)生樹,討論腸胃蠅蛆與其他雙翅目蠅類間進(jìn)化關(guān)系。采用PCR等方法獲得兩個(gè)腸胃蠅蛆樣品的線粒體全基因組序列長度分別為15687 bp(黑龍江)和15660 bp(新疆),包括13個(gè)蛋白質(zhì)編碼基因(PCGs)、22個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)RNA基因、2個(gè)核糖體RNA基因和1個(gè)D-loop區(qū);A+T含量(70.2%和70.3%)明顯高于G+C含量,這種高AT含量的現(xiàn)象在大多數(shù)蜘蛛昆蟲中亦普遍存在。以線粒體13個(gè)蛋白質(zhì)編碼基因串聯(lián)作為基因標(biāo)記,采用MP、ML和BI法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)生樹的結(jié)果基本一致。結(jié)果顯示進(jìn)化樹形成二個(gè)大的分支,胃蠅科、狂蠅科和寄蠅科形成一個(gè)分支,其它科蟲體形成另一分支;在前一分支中,來自黑龍江和新疆地區(qū)的樣品形成一個(gè)小分支,與紋皮蠅的關(guān)系較其它近。本研究的結(jié)果與已報(bào)道結(jié)果基本一致,表明線粒體全基因組是研究寄生蟲系統(tǒng)發(fā)生很好的遺傳基因標(biāo)記。本研究首次對黑龍江和新疆的腸胃蠅蛆的線粒體序列變異情況進(jìn)行了研究,首次獲得了腸胃蠅蛆線粒體基因組全序列并對其特征進(jìn)行分析,豐富了寄生蠅類線粒體基因組數(shù)據(jù),為馬胃蠅蛆的種群遺傳、分子進(jìn)化的研究提供了遺傳標(biāo)記。
【關(guān)鍵詞】：馬 腸胃蠅蛆 遺傳變異 線粒體基因組 系統(tǒng)進(jìn)化分析
【學(xué)位授予單位】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.7
【目錄】：

• 摘要4-6
• abstract6-10
• 第一章 文獻(xiàn)綜述10-32
• 1.1 馬胃蠅蛆病10-16
• 1.1.1 病原10-12
• 1.1.2 生活史12-13
• 1.1.3 流行病學(xué)13-15
• 1.1.4 致病作用及癥狀15
• 1.1.5 馬胃蠅蛆病的防控15-16
• 1.2 雙翅目昆蟲線粒體基因組的研究進(jìn)展16-32
• 1.2.1 雙翅目昆蟲線粒體基因組測定完成概況16-28
• 1.2.2 昆蟲線粒體特點(diǎn)28-29
• 1.2.3 線粒體基因組在昆蟲中的應(yīng)用29-32
• 第二章 兩個(gè)地區(qū)馬腸胃蠅蛆部分線粒體基因序列的遺傳變異分析32-48
• 2.1 材料與方法32-41
• 2.1.1 材料32-35
• 2.1.2 方法35-38
• 2.1.3 測序38-41
• 2.2 結(jié)果41-47
• 2.2.1 馬腸胃蠅蛆線粒體cox1、nad5和rrn L基因擴(kuò)增結(jié)果41-42
• 2.2.2 不同地區(qū)馬腸胃蠅蛆線粒體序列分析和進(jìn)化分析42-47
• 2.3 討論47-48
• 第三章 馬腸胃蠅蛆線粒體全基因組序列及系統(tǒng)發(fā)生研究48-81
• 3.1 材料與方法48-55
• 3.1.1 材料48-49
• 3.1.2 方法49-55
• 3.2 結(jié)果55-77
• 3.2.1 腸胃蠅蛆線粒體的各基因序列PCR擴(kuò)增及鑒定55-63
• 3.2.2 腸胃蠅蛆線粒體全基因組分析63-76
• 3.2.3 進(jìn)化分析76-77
• 3.3 討論77-81
• 3.3.1 腸胃蠅蛆線粒體基因組的結(jié)構(gòu)特征77-78
• 3.3.2 蛋白編碼基因特征78
• 3.3.3 t RNA基因和核糖體基因78-79
• 3.3.4 非編碼區(qū)79
• 3.3.5 進(jìn)化分析79-81
• 第四章 全文結(jié)論81-83
• 附錄83-87
• 參考文獻(xiàn)87-95
• 致謝95-97
• 作者簡歷97

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本文編號：763399