發(fā)布時(shí)間：2017-08-30 19:47

  本文關(guān)鍵詞：中華絨螯蟹FAD6-b基因的全長克隆及原核表達(dá)分析

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【摘要】：根據(jù)已登錄的中華絨螯蟹一種Δ6去飽和酶基因(Accession Number:JX946434)及菁夜蛾去飽和酶基因(Accession Number:KJ622055.1)的保守區(qū)設(shè)計(jì)引物,通過逆轉(zhuǎn)錄PCR以及RACE技術(shù)克隆了中華絨螯蟹另一種Δ6去飽和酶基因FAD6-b的全長序列。經(jīng)序列分析,中華絨螯蟹FAD6-b cDNA全長為2 310 bp,其中開放閱讀框(ORF)為1 326 bp,共編碼442個(gè)氨基酸(Accession Number:KP876058),理論分子量為50.86 ku,理論等電點(diǎn)為8.47,FAD6-b基因的氨基酸序列與已公布的一條中華絨螯蟹Δ6去飽和酶基因的一致性為76%。原核表達(dá)載體構(gòu)建及其表達(dá)實(shí)驗(yàn)表明,中華絨螯蟹FAD6-b基因成功重組到原核表達(dá)載體pCold-TF DNA中,重組質(zhì)粒pCold TF-fad6b在大腸桿菌BL21(DE3)pLysS中進(jìn)行表達(dá),經(jīng)SDS-PAGE電泳分析表明,IPTG誘導(dǎo)后的重組菌出現(xiàn)了單一的蛋白條帶,且大小與預(yù)期(105.86 ku)一致,可溶性分析顯示目的蛋白主要存在于蛋白上清液中。對重組蛋白進(jìn)行純化,蛋白純化液經(jīng)電泳檢測后顯示出特異性單一條帶,進(jìn)一步證明了pCold TF-fad6b的成功構(gòu)建和表達(dá)。目的蛋白經(jīng)Western-blotting檢測,結(jié)果表明獲得的重組蛋白與6×His抗體進(jìn)行了特異性結(jié)合,顯示出良好的免疫學(xué)活性。
【作者單位】： 上海海洋大學(xué)農(nóng)業(yè)部淡水水產(chǎn)種質(zhì)資源重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 中華絨螯蟹 Δ脂肪酸去飽和酶 基因克隆 原核表達(dá)
【基金】：國家“八六三”高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(2012AA10A409-5) 國家自然科學(xué)基金(31472287) 上海教委知識服務(wù)平臺專項(xiàng)(ZF1206) 科技部港澳臺科技合作專項(xiàng)(2014DFT30270) 上海市科委優(yōu)秀學(xué)術(shù)帶頭人專項(xiàng)(12XD1402700) 上海市科技興農(nóng)重點(diǎn)攻關(guān)專項(xiàng)(滬農(nóng)科2013第5-7號)~~
【分類號】：S917.4
【正文快照】： 脂肪酸去飽和酶(fatty acid desaturase,大困難。FAD6是合成長鏈多不飽和脂肪酸(longFAD)能夠催化飽和脂肪酸(saturated fatty acids)或chain polyunsaturated fatty acids,LC-PUFAs)的限不飽和脂肪酸(unsaturated fatty acids,UFAs)在酰速酶[5],在脂肪酸代謝過程中發(fā)揮了重要

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本文編號：761101