本文關(guān)鍵詞：冷脅迫下紫花苜蓿越冬芽組織結(jié)構(gòu)觀(guān)察與抗寒基因的研究

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【摘要】：紫花苜蓿[Medicago sativa L.]作為理想的人工飼草草地栽培品種,可為青藏高原草地畜牧業(yè)的發(fā)展提供一條可持續(xù)發(fā)展的新途徑。本文通過(guò)顯微結(jié)構(gòu)觀(guān)測(cè)探索冷脅迫下青大1號(hào)紫花苜蓿新品系越冬芽組織結(jié)構(gòu)變化情況;利用基因工程技術(shù)獲得新品系抗寒基因的全長(zhǎng)序列,并對(duì)該基因進(jìn)行鑒定及分析。試驗(yàn)結(jié)果表明:隨著脅迫時(shí)間逐漸延長(zhǎng)新品系紫花苜蓿越冬芽組織結(jié)構(gòu)越發(fā)紊亂,外表皮出現(xiàn)破裂現(xiàn)象,部分細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)出現(xiàn)明顯變形;在溫度達(dá)到零下20℃,處理時(shí)間24 h時(shí),部分紫花苜蓿越冬芽組織細(xì)胞核及細(xì)胞器出現(xiàn)解離現(xiàn)象。提取青大1號(hào)紫花苜蓿[Medicago sativa L.cv.Qingda No.1]越冬芽總RNA,獲得cDNA,根據(jù)Genebank中發(fā)布的CAS序列設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,進(jìn)行原核表達(dá),得到377 bp的片段,該紫花苜蓿CAS包含了一個(gè)361 bp的開(kāi)放閱讀框,與紫花苜蓿BudCAR6基因(AF220458.1)同源性為96%,與紫花苜蓿pMSACIB CAS15B(L12462.1)同源性為95%,與扁蓿豆CAS15B(KF208641.1)同源性為90%。推測(cè)編碼了120個(gè)氨基酸。
【關(guān)鍵詞】：紫花苜蓿 冷耐受性 抗寒基因 克隆 越冬芽組織結(jié)構(gòu)圖
【學(xué)位授予單位】：青海大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S541.9
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 第一章 引言9-16
• 1.1 青藏高原草地畜牧業(yè)簡(jiǎn)介9-10
• 1.1.1 青藏高原草地畜牧業(yè)的現(xiàn)狀研究9
• 1.1.2 青藏高原草地畜牧業(yè)發(fā)展存在的問(wèn)題及思考9-10
• 1.2 紫花苜蓿及紫花苜蓿人工草地產(chǎn)業(yè)10-15
• 1.2.1 紫花苜蓿的基本介紹10-11
• 1.2.2 青藏高原紫花苜蓿人工草地產(chǎn)業(yè)的發(fā)展現(xiàn)狀11
• 1.2.3 紫花苜蓿生物學(xué)特性11-12
• 1.2.4 抗寒基因概況12-15
• 1.3 本研究目的與意義15-16
• 第二章 低溫脅迫下青大1號(hào)紫花苜蓿組織顯微結(jié)構(gòu)研究16-24
• 2.1 前言16
• 2.2 試驗(yàn)材料16-17
• 2.2.1 試驗(yàn)材料16
• 2.2.2 試驗(yàn)材料準(zhǔn)備及預(yù)處理16-17
• 2.3 主要試驗(yàn)設(shè)備與試劑17
• 2.3.1 主要試驗(yàn)試劑17
• 2.3.2 主要試驗(yàn)儀器設(shè)備17
• 2.4 試驗(yàn)方法17-19
• 2.4.1 石蠟永久切片的制作17-19
• 2.4.2 顯微鏡檢測(cè)19
• 2.4.3 試驗(yàn)數(shù)據(jù)整理分析19
• 2.5 試驗(yàn)結(jié)果19-22
• 2.5.1 低溫脅迫條件下青大1號(hào)紫花苜蓿越冬芽顯微圖分析19-20
• 2.5.2 低溫脅迫條件下青大1號(hào)紫花苜蓿越冬芽顯微圖數(shù)據(jù)分析20-22
• 2.6 討論22-23
• 2.7 小結(jié)23-24
• 第三章 青大1號(hào)紫花苜蓿CAS克隆表達(dá)及鑒定24-37
• 3.1 前言24
• 3.2 試驗(yàn)材料24-25
• 3.2.1 樣品采集地點(diǎn)概況24
• 3.2.2 試驗(yàn)樣品采集24
• 3.2.3 試驗(yàn)樣品預(yù)處理24-25
• 3.3 主要試驗(yàn)設(shè)備與試劑25
• 3.3.1 試驗(yàn)主要試劑25
• 3.3.2 試驗(yàn)主要儀器設(shè)備25
• 3.4 試驗(yàn)方法25-31
• 3.4.1 引物設(shè)計(jì)合成25-26
• 3.4.2 總RNA的提取和cDNA鏈的合成26
• 3.4.3 RNA的檢測(cè)26-27
• 3.4.4 單鏈cDNA的合成27-28
• 3.4.5 PCR擴(kuò)增28-29
• 3.4.6 產(chǎn)物的回收29
• 3.4.7 紫花苜蓿擴(kuò)增目的基因片段與載體的連接29-30
• 3.4.8 目的基因的轉(zhuǎn)化30
• 3.4.9 目的基因片段質(zhì)粒DNA的提取、表達(dá)及測(cè)序30
• 3.4.10 青大1號(hào)紫花苜蓿抗寒基因的鑒定及生物信息學(xué)分析30-31
• 3.5 結(jié)果31-35
• 3.5.1 總RNA提取結(jié)果31
• 3.5.2 RT-PCR結(jié)果分析31-32
• 3.5.3 產(chǎn)物回收結(jié)果32
• 3.5.4 紫花苜蓿擴(kuò)增目的基因片段與載體的連接、目的基因轉(zhuǎn)化32
• 3.5.5 青大1號(hào)紫花苜蓿抗寒基因的鑒定及生物信息學(xué)分析32-35
• 3.6 討論35
• 3.7 小結(jié)35-37
• 第四章 結(jié)論37-38
• 4.1 低溫脅迫下青大1號(hào)紫花苜蓿組織顯微結(jié)構(gòu)研究結(jié)論37
• 4.2 青大1號(hào)紫花苜�？购蛳嚓P(guān)研究結(jié)論37-38
• 參考文獻(xiàn)38-43
• 致謝43-44
• 作者簡(jiǎn)介44-45

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1 華秋瑾,錢(qián)均瑞,陳良正,儲(chǔ)一寧;桑樹(shù)芽組織培養(yǎng)的初步研究[J];云南農(nóng)業(yè)科技;1998年05期

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1 尹衛(wèi);冷脅迫下紫花苜蓿越冬芽組織結(jié)構(gòu)觀(guān)察與抗寒基因的研究[D];青海大學(xué);2016年

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本文編號(hào)：752103