本文關鍵詞：蘇云金芽胞桿菌cry1Ie新基因的克隆、表達與生物活性測定

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【摘要】：為獲得新的鱗翅目害蟲殺蟲基因,根據(jù)已知cry1I類基因編碼區(qū)設計簡并引物,采用直接克隆法,以蘇云金芽胞桿菌(Bacillus thuringiensis,Bt)菌株BN23-5質粒DNA為模板進行擴增,并對得到的基因進行鑒定和分析。結果表明:克隆得到一個完整的cry1Ie基因,全長2 160 bp,由719個氨基酸組成,該氨基酸序列與已知的4種Cry1Ie蛋白不同,與Cry1Ie2和Cry1Ie3的氨基酸序列同源性最高,為95.4%,被國際Bt殺蟲晶體蛋白基因命名委員會命名為Cry1Ie5(登錄號為KJ710646)。將該基因插入表達載體p ET-28a,轉化大腸桿菌BL21(DE3),IPTG低溫誘導成功表達,SDS-PAGE電泳驗證其大小為81 k D,與預測的分子量相符合。生物活性測定表明,Cry1Ie5表達的包涵體蛋白對小菜蛾和亞洲玉米螟具有殺蟲活性,LC_(50)分別為0.43μg/m L和48.39μg/m L;對棉鈴蟲的致死率不高,但能明顯抑制其生長;對甜菜夜蛾沒有殺蟲活性。
【作者單位】： 四川農業(yè)大學水稻研究所;四川農業(yè)大學西南作物基因資源與遺傳改良教育部重點實驗室;
【關鍵詞】： 蘇云金芽胞桿菌 cryIe基因 鱗翅目害蟲 克隆
【基金】：國家重大轉基因專項(2011ZX08009-003-001-009)
【分類號】：S476
【正文快照】： 蘇云金芽胞桿菌(Bacillus thuringiensis,Bt)為革蘭氏陽性細菌(Schnepf et al.,1998),主要分布在土壤、塵埃、淤泥、蟲尸、污水等介質中。Bt可以在形成芽孢的同時產生晶體,晶體蛋白(insecticidal crys-tal proteins,ICPs)主要由cry和cyt基因編碼,具有特異的殺蟲活性,如農業(yè)害

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