本文關(guān)鍵詞：6種重金屬化合物對(duì)人Bel-7402肝癌細(xì)胞毒性及EGFP基因DNA甲基化的影響

  更多相關(guān)文章： 鉛 銅 Bel-7402細(xì)胞 去甲基化 MTS

【摘要】：目的:以體外培養(yǎng)人Bel-7402肝癌細(xì)胞為模型,研究氯化鉛(Pb Cl2)、乙酸鉛(Pb(CH3COO)2)、硝酸鉛(Pb(NO3)2)、氯化銅(Cu Cl2)、乙酸銅(Cu(CH3COO)2)、硝酸銅(Cu(NO3)2)等幾種常見(jiàn)重金屬化合物的細(xì)胞毒性和去甲基化表觀遺傳毒性。方法:應(yīng)用MTS方法檢測(cè)細(xì)胞的存活率,以前期研究建立的化學(xué)物去甲基化表觀遺傳毒性評(píng)價(jià)新方法評(píng)價(jià)化合物的去甲基化表觀遺傳毒性(使用DNA甲基化酶對(duì)p EGFP-C3質(zhì)粒綠色熒光蛋白基因的啟動(dòng)子區(qū)進(jìn)行甲基化修飾,隨后將該質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進(jìn)人類Bel-7402肝癌細(xì)胞株,以所研究的化合物對(duì)上述轉(zhuǎn)染后的Bel-7402細(xì)胞進(jìn)行染毒處理,最后根據(jù)細(xì)胞綠色熒光強(qiáng)度和熒光陽(yáng)性細(xì)胞比例來(lái)定性定量評(píng)價(jià)研究物質(zhì)的去甲基化表觀遺傳毒性強(qiáng)弱,簡(jiǎn)稱QDMP方法)。結(jié)果:所研究的6種化合物通過(guò)MTS實(shí)驗(yàn)顯示均會(huì)抑制Bel-7402細(xì)胞的增殖。通過(guò)對(duì)同種重金屬三種不同化合物類型的不同染毒濃度的細(xì)胞存活率進(jìn)行配對(duì)設(shè)計(jì)t檢驗(yàn)后顯示,除了硝酸鉛和乙酸鉛對(duì)Bel-7402細(xì)胞存活率的影響有顯著性差異外,其余各同種重金屬不同化合物間的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而不同種重金屬間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,其對(duì)Bel-7402細(xì)胞抑制能力為銅高于鉛。去甲基化表觀遺傳毒性檢測(cè)結(jié)果顯示,Pb Cl2、Pb(CH3COO)2、Pb(NO3)2、Cu Cl2、Cu(CH3COO)2、Cu(NO3)2均可觀察到明顯的去甲基化表觀遺傳毒性,其相對(duì)于5-氮-2-脫氧胞苷(5-Aza-Cd R)的去甲基化表觀遺傳毒性當(dāng)量分別為2.82E-03、1.50E-03、5.09E-04、3.31E-05、6.87E-05、3.45E-05。通過(guò)對(duì)同種重金屬三種不同化合物類型的不同染毒濃度的去甲基化表觀遺傳毒性單量值進(jìn)行配對(duì)設(shè)計(jì)t檢驗(yàn)后顯示差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而不同種重金屬間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,其去甲基化能力大小為鉛高于銅。結(jié)論:鉛和銅化合物均會(huì)使Bel-7402細(xì)胞的細(xì)胞存活率和轉(zhuǎn)染進(jìn)細(xì)胞的質(zhì)粒上增強(qiáng)型綠色熒光蛋白基因啟動(dòng)子的DNA甲基化水平下降,但各重金屬不同化合物鹽類之間的去甲基化毒性無(wú)顯著性差異。這表明銅和鉛化合物的毒性與其所攜帶的陰離子關(guān)系不大,只與其重金屬離子本身有關(guān)。不同種重金屬之間,銅化合物對(duì)Bel-7402細(xì)胞抑制能力高于鉛化合物,而鉛化合物的去甲基化能力高于銅化合物。表明化合物對(duì)細(xì)胞的毒性作用與其致DNA甲基化的改變并沒(méi)有絕對(duì)的關(guān)系。
【關(guān)鍵詞】：鉛 銅 Bel-7402細(xì)胞 去甲基化 MTS
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R114
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 1 引言10-13
• 2 材料與方法13-27
• 2.1 主要儀器與試劑13-16
• 2.2 化合物的細(xì)胞毒性檢測(cè)16-18
• 2.3 化合物的去甲基化能力檢測(cè)18-27
• 2.4 分析方法27
• 3 結(jié)果27-35
• 3.1 細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-30
• 3.2 p EGFP-C3質(zhì)粒甲基化處理效果30-31
• 3.3 各染毒化合物的去甲基化情況31-35
• 4 討論35-37
• 5 結(jié)論37-38
• 參考文獻(xiàn)38-43
• 附件43-45
• 附錄45-47
• 致謝47-48
• 綜述48-71
• 參考文獻(xiàn)64-71

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本文編號(hào)：715608