植酸酶的分子生物學(xué)與基因工程
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植酸酶的分子生物學(xué)與基因工程
摘要植酸酶是一種新型的、可作為動(dòng)物飼料添加劑的重要酵制劑,它對(duì)提 高飼料中磷的利用率.提高動(dòng)物的生產(chǎn)性能,以及減輕因動(dòng)物高磷糞便所導(dǎo)致 的環(huán)境水域的磷污染有著重要意義。 植酸酶是一種能水解植酸的磷酸酶類。它能將植酸磷(六磷酸肌醇)降解為 肌醇和無(wú)機(jī)磷酸。 此酶分為兩類: 3植酸酶(EC. 1 3 8)和6一植酸酶(EC 3 1 2. 3 6
)。 植酸酶廣泛存在于植物、動(dòng)物和微生物中.如玉米、小麥等高等植物,枯草芽 孢桿菌、假單孢桿菌、乳酸桿菌、大腸桿菌等原核微生物及酵母、根霉、曲霉 等真核教生物中。 在備物、豆類和油料等作物籽實(shí)中.磷的基本貯存形式是植酸磷?,其含量 高達(dá)1%~3l{6.它占植物中總磷的60%~80%。但是以植酸磷形式存在的磷卻 固單胃動(dòng)物體內(nèi)缺乏能分解植酸的酶而難以被利用, 其利用率僅在0%~40%. 從 而造成了許多問(wèn)題:首先是造成磷源浪費(fèi)!,一方面鈳料中的磷源不能得到有 效利用,另一方面為了滿足動(dòng)物對(duì)磷的需求,衛(wèi)必須在飼料中添加無(wú)機(jī)磷.提高 了飼料成本;其次是形成高磷糞便污染環(huán)境【2 J。飼料中85%左右的植酸磷會(huì) 被動(dòng)物直接排出體外,糞便中大量的植酸磷使水和土壤受到嚴(yán)重污染。另外,植 酸磷還是一種抗?fàn)I養(yǎng)園子, 它在動(dòng)物胃腸道的消化吸收過(guò)程中會(huì)與多種金屬離子 如Zn”、c,+、Cu”、Fe2+等以及蛋白質(zhì)螯合成相應(yīng)的不溶性復(fù)合物,降低了動(dòng) 物對(duì)這些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的有效利用【3]。 植酸酶可作為一種單胃動(dòng)物的飼料添加劑, 它的飼喂效果已在世界范圍內(nèi)得 到了確證“。它可使植物性飼料中磷的利用率提高60%,糞便中磷排泄量減少 40%, 同時(shí)還可降低植酸的抗?fàn)I養(yǎng)作用。因此在飼料中添加植酸酶對(duì)提高畜禽業(yè) 生產(chǎn)效益及降低植酸磷對(duì)環(huán)境的污染有重要意義。但是,植酸酶到目前為止并沒(méi) 有在飼料中得到廣泛的推廣應(yīng)用,主要原因在于:1.植酸酶在天然材料中的含 量太低,難以大量生產(chǎn),生產(chǎn)成本昂貴;2.植酸酶的抗逆性,尤其是熱穩(wěn)定性 不能完全滿足飼料及飼料加工的要求。隨著基因工程技術(shù)的發(fā)展.為這些問(wèn)題的 解決提供了一條有效的新途徑,檀酸酶的基因工程研究已成為世界性的研究熱 點(diǎn)。
收稿El期:1999.(14.12,修回日期:1999,09—25, 1 植酸酶約分子生物學(xué) 早在1907年Suzuki等¨· 就在答糠中發(fā)現(xiàn)了具有植酸酶活性的磷酸酶,接下 來(lái)的較長(zhǎng)的一個(gè)時(shí)期中. 研究都集中在植物和動(dòng)物器官中的植酸酶.第一個(gè)純化 的植酸酶來(lái)源于麩皮,研究發(fā)現(xiàn)它雖然具有植酸酶活性.但植酸并不是它的特異 性底物。來(lái)源于植物的植酸酶均屬于6植酸酶.最適pH范圍在5.0~7,5.不適 合在單胃畜禽酸性的胃中起作用.而且在植物中含量扳低,因而從應(yīng)用的角度出 發(fā).60年代末植酸酶的研究轉(zhuǎn)向最適pH值為酸性、酶含量較高的微生物來(lái) 源的植酸酶。 1.1微生物來(lái)源的植酸酶的酶學(xué)性質(zhì) 許多微生物都能產(chǎn)生植酸酶.尤其在曲霉屬中。1968年Shieh等“發(fā)現(xiàn)所用 的 22 株 黑 曲 霉 菌 中 有 2L 株 能 產(chǎn) 生 植 酸 酶 。 第 一 個(gè) 被 分 離 純 化 的 植 酸 酶 Aspergitlusterreus No.9A一1【“.它的最適pH值為4.5,最適酶反應(yīng)溫度為 70℃,此酶在pH 1.2~9.0均能穩(wěn)定維持其活性。從此以后.陸續(xù)從十幾種微 生物中分離到植酸酶,如枯草芽孢桿菌‘“、假單孢桿苗‘?、乳酸桿菌‘1?、 大腸桿菌?]、酵母【”】、曲霉”、隔孢伏革菌?1等,并對(duì)酶的生理生化性質(zhì)進(jìn) 行了較深入的研究。其中來(lái)源于A.m㈣NRRL3135(Aniger vat alvanwri)的植酸 酶PHYA具有較好的耐熱性, 在酸性條件下有較高的酶括性,被認(rèn)為是目前最具有 應(yīng)用前景的飼用植酸酶,其酶學(xué)性質(zhì)研究也較為探入【14。來(lái)源于A位““m NRRL3135(A nigermaⅡ;arnori)的植酸酶PHYA屬于3一植酸酶.是一種檐基化蛋 白,糖基化含量為27.3%,糖鏈中富含甘露糖,表觀分子量約為85kD。它的最 適pH值為2.5和5.5.最適溫度為55℃,在37℃、pH2 5的條件下.以植酸鈉為 底物的Km值為50mm01.Ca2+、Ve2+對(duì)酶活性無(wú)影響,Mn”、CJ+有激活作用,,能 使酶活性分另Ⅱ提高30%和13%,c艫+、Zn2+、Fe”和Cu+對(duì)酶活掛喜罐翩作掩+ 萁孛囂兩種鴦囂競(jìng)爭(zhēng)掛捧裁,磊兩種鴦競(jìng)爭(zhēng)性抑制。另外,對(duì)一些來(lái)源于動(dòng)物、 植物的酸性磷酸酶有攛割侔塌的攙測(cè)粼婦L(+) 濺石酸、磷霉豢
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