本文關(guān)鍵詞：短小芽孢桿菌實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析中內(nèi)參基因的篩選

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【摘要】：為了利用熒光定量PCR方法分析短小芽孢桿菌的基因表達(dá)水平,需要首先確定適合該菌株的熒光定量PCR分析內(nèi)參基因。以短小芽孢桿菌的16S rRNA、mecA、cadR、rpoB及sphP共5個(gè)基因作為候選內(nèi)參基因,利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法分析這5個(gè)候選基因在短小芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)不同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)情況,再用geNorm和NormFinder軟件評(píng)估它們的表達(dá)穩(wěn)定性。結(jié)果顯示,利用geNorm軟件分析得出16S rRNA和mecA是表達(dá)最穩(wěn)定的基因,最適內(nèi)參基因數(shù)為2。NormFindr軟件分析得出mecA為最穩(wěn)定的基因。對(duì)短小芽孢桿菌3個(gè)功能基因的差異表達(dá)分析結(jié)果表明,16S rRNA和mecA都是合適的內(nèi)參基因,而mecA基因由于表達(dá)豐度適中,更適合于作為內(nèi)參基因研究結(jié)構(gòu)基因的表達(dá)。為了得到更準(zhǔn)確的差異表達(dá)結(jié)果,也可用兩個(gè)基因同時(shí)進(jìn)行校正。
【作者單位】： 四川大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 短小芽孢桿菌 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 內(nèi)參基因 geNorm NormFinder
【基金】：國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(“863”計(jì)劃)(2012AA022204)
【分類號(hào)】：Q78
【正文快照】： 近年來(lái),實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于不同生物基因表達(dá)的絕對(duì)定量和相對(duì)定量研究,這項(xiàng)技術(shù)因具有高靈敏性、高效性、準(zhǔn)確性和重復(fù)性好等特點(diǎn),已成為分子生物學(xué)研究領(lǐng)域基因表達(dá)分析的重要方法之一,被大量用于分析基因在不同發(fā)育時(shí)期以及經(jīng)過(guò)不同處理的樣本間的表達(dá)差異

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