本文關(guān)鍵詞：玉米象線粒體細(xì)胞色素C氧化酶亞基Ⅲ基因克隆與表達(dá)分析

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【摘要】：【目的】克隆辣根素可能的作用位點(diǎn)——細(xì)胞色素C氧化酶亞基Ⅲ(COXⅢ)的全長(zhǎng)cDNA,并對(duì)其進(jìn)行序列分析及原核表達(dá)�！痉椒ā吭贜CBI數(shù)據(jù)庫(kù)中查找玉米象(Sitophilus zeamais)COXⅢ已知的部分序列,利用RT-PCR,結(jié)合RACE技術(shù)克隆獲得玉米象COXⅢ全長(zhǎng)序列;利用DNAMAN8.0、MEGA5.1、GENEDOC、Prot Param和Target P 1.1 Server等軟件對(duì)該基因全長(zhǎng)cDNA序列、系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系、基本理化性質(zhì)及其三維結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析;將玉米象COXⅢ基因分別與載體p EASY-Blunt E1、pET28a、pET30a、p ET32a、pET42a連接,構(gòu)建原核表達(dá)載體p EASY-Blunt E1-COXⅢ、pET28a-COXⅢ、pET30a-COXⅢ、p ET32a-COXⅢ、pET42a-COXⅢ并分別轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3)中,在不同IPTG誘導(dǎo)濃度、溫度以及時(shí)間內(nèi)誘導(dǎo)融合蛋白表達(dá),采用SDS-PAGE和Western blot(WB)對(duì)表達(dá)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證�！窘Y(jié)果】獲得的玉米象COXⅢ基因全長(zhǎng)cDNA序列開(kāi)放閱讀框(ORF)為792 bp,編碼263個(gè)氨基酸,編碼的蛋白分子質(zhì)量約為30 938.1 Da,理論等電點(diǎn)p I 6.51,預(yù)測(cè)分子式為C1492H2154N338O362S10,不穩(wěn)定系數(shù)為34.49,總平均親水系數(shù)為0.492,為疏水的穩(wěn)定蛋白。系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)顯示玉米象與鞘翅目象鼻蟲(chóng)科昆蟲(chóng)米象進(jìn)化關(guān)系最近。原核表達(dá)結(jié)果表明,該蛋白在18℃、1 mmol·L-1 IPTG誘導(dǎo)24 h的條件下即能實(shí)現(xiàn)融合蛋白的表達(dá),可溶性檢測(cè)表明該蛋白主要以包涵體的形式存在;Western blot印跡檢測(cè)證實(shí)大腸桿菌BL21(DE3)中表達(dá)了一個(gè)分子量約為62 k D的融合蛋白。【結(jié)論】成功從玉米象昆蟲(chóng)克隆得到COXⅢ全長(zhǎng)cDNA序列,并實(shí)現(xiàn)了其編碼蛋白的原核表達(dá),可為后續(xù)探究玉米象COXⅢ功能和異硫氰酸酯類化合物對(duì)玉米象的作用機(jī)理提供理論依據(jù)。
【作者單位】： 西北農(nóng)林科技大學(xué)無(wú)公害農(nóng)藥研究服務(wù)中心;陜西省生物農(nóng)藥工程技術(shù)研究中心;
【關(guān)鍵詞】： 玉米象 細(xì)胞色素C氧化酶亞基Ⅲ RACE技術(shù) 生物信息學(xué) 原核表達(dá)
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31101457) 西北農(nóng)林科技大學(xué)基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金(2452015014)
【分類號(hào)】：S379.5
【正文快照】： 0引言【研究意義】玉米象(Sitophilus zeamais)是一種世界性的儲(chǔ)糧害蟲(chóng)[1],也是較難防治的倉(cāng)儲(chǔ)害蟲(chóng)之一[2]。目前防治玉米象主要使用化學(xué)合成熏蒸劑,如溴甲烷、硫酰氟以及磷化鋁等。2015年,溴甲烷在全球范圍內(nèi)已被禁用,磷化氫也因長(zhǎng)期使用引起嚴(yán)重的抗藥性問(wèn)題[3-4],因此尋找

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李淑榮,王殿軒,高美須,原鍇,溫賢芳;電子束處理對(duì)玉米象繁殖力的影響[J];核農(nóng)學(xué)報(bào);2005年01期

2 白春?jiǎn)?曹陽(yáng);尚艷娥;咼琴;李燕羽;;米象和玉米象蠟層與護(hù)蠟層成分的氣質(zhì)聯(lián)用鑒定[J];糧食儲(chǔ)藏;2007年06期

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5 曾正;;影響米象和玉米象為害小麥和玉米的一些因素[J];糧食儲(chǔ)藏;1989年01期

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10 邱艷;宋旭紅;薛東;楊長(zhǎng)舉;林開(kāi)春;韓波;謝令德;舒在習(xí);;蛇床子素乳油對(duì)玉米象的防效及毒力分析[J];湖北農(nóng)業(yè)科學(xué);2007年01期

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1 周增臣 楊靈朋;誘集防治玉米象方法[N];山東科技報(bào);2001年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 王繼婷;三種蛀食性害蟲(chóng)磷化氫抗性與有效濃度及溯源研究[D];河南工業(yè)大學(xué);2016年

2 趙源;辣根素（AITC）對(duì)玉米象成蟲(chóng)酶的影響及與COX1結(jié)合位點(diǎn)預(yù)測(cè)[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

3 郭立輝;儲(chǔ)糧中昆蟲(chóng)和霉菌產(chǎn)生二氧化碳特性研究[D];河南工業(yè)大學(xué);2015年

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本文編號(hào)：696880