本文關(guān)鍵詞：超聲聯(lián)合聲諾維微泡介導(dǎo)wtp53基因轉(zhuǎn)染鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究

  更多相關(guān)文章： 超聲 微泡 wtp53基因 膠質(zhì)瘤 轉(zhuǎn)染

【摘要】：目的腦膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見(jiàn)的腫瘤,約占顱內(nèi)腫瘤的40%-60%。由于其侵襲特性及由低級(jí)別向高級(jí)別轉(zhuǎn)化的趨勢(shì),使得手術(shù)治療難以根治腫瘤,且放療和化療效果不佳,術(shù)后復(fù)發(fā)率高,預(yù)后差,死亡率高。而癌基因、抑癌基因在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮了重要作用,其中原癌基因的激活與抑癌基因的失活使其對(duì)細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)失控。野生型p53(wtp53)作為一種常見(jiàn)的抑癌基因,其主要生物學(xué)功能是通過(guò)一系列信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)節(jié)細(xì)胞周期及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡來(lái)維持細(xì)胞基因組的穩(wěn)定性,從而抑制腫瘤的發(fā)生。本文旨在探討超聲靶向破壞微泡(UTMD)技術(shù)增強(qiáng)wtp53基因轉(zhuǎn)染鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞的可行性,同時(shí)對(duì)該轉(zhuǎn)染體系的微泡濃度、質(zhì)粒濃度等參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化。方法將體外培養(yǎng)的鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞懸液分為空白對(duì)照組、質(zhì)粒+超聲組、質(zhì)粒+微泡組、超聲+微泡組、質(zhì)粒+超聲+微泡組;并將質(zhì)粒+超聲+微泡組按微泡濃度分為5%、10%、20%、30%、40%;再按質(zhì)粒濃度分為5μg/ml、10μg/ml、15μg/ml、20μg/ml、30μg/ml。輻照條件:采用頻率1MHz、聲強(qiáng)0.8W/cm2、占空比20%、持續(xù)時(shí)間50s。在37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)24h-48h,用熒光顯微鏡觀察細(xì)胞轉(zhuǎn)染率、臺(tái)盼藍(lán)染色法檢測(cè)細(xì)胞存活率、逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)檢測(cè)膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞中的wtp53 m RNA表達(dá)量、流式細(xì)胞儀檢測(cè)C6細(xì)胞凋亡百分比及細(xì)胞周期分布。結(jié)果1、微泡濃度為20%、30%時(shí),細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率較高,但微泡濃度為30%的C6細(xì)胞存活率比微泡濃度為20%的降低,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。質(zhì)粒濃度為15μg/ml時(shí),細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率最高(P0.05),而C6細(xì)胞存活率有所下降(P0.05);質(zhì)粒濃度為20μg/ml、30μg/ml時(shí)細(xì)胞存活率顯著下降(P0.01)。因此,微泡濃度20%、質(zhì)粒濃度15μg/ml為該轉(zhuǎn)染體系最佳參數(shù)。2、UTMD作為一種安全有效的轉(zhuǎn)染方法,目的基因可以在細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定表達(dá),并發(fā)揮其相關(guān)效應(yīng)。超聲+微泡組的細(xì)胞存活率與其他組相比(除質(zhì)粒+超聲+微泡組),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與其他組比較,質(zhì)粒+超聲+微泡組細(xì)胞存活率的降低有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);質(zhì)粒+微泡+超聲組的轉(zhuǎn)染效率最高,轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的wtp53 m RNA的表達(dá)量增多,流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞凋亡百分比明顯增高,細(xì)胞周期G0/G1期細(xì)胞數(shù)增多(P0.05)。結(jié)論UTMD可增強(qiáng)p EGFP-C1-wtp53在鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞系中的轉(zhuǎn)染,且wtp53基因可進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：超聲 微泡 wtp53基因 膠質(zhì)瘤 轉(zhuǎn)染
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.41;R445.1
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 中英文縮略語(yǔ)對(duì)照表11-12
• 第一部分 超聲聯(lián)合聲諾維微泡介導(dǎo)pEGFP-C1-wtp53質(zhì)粒轉(zhuǎn)染膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞的參數(shù)優(yōu)化12-29
• 1 前言12-14
• 2 材料與方法14-20
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果20-21
• 4 討論21-24
• 5 小結(jié)24-25
• 附圖25-27
• 參考文獻(xiàn)27-29
• 第二部分 超聲聯(lián)合聲諾維微泡介導(dǎo)wtp53基因轉(zhuǎn)染鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究29-54
• 1 前言29-32
• 2 材料與方法32-41
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果41-43
• 4 討論43-46
• 5 小結(jié)46-47
• 附圖47-51
• 參考文獻(xiàn)51-54
• 綜述 超聲微泡造影劑的應(yīng)用進(jìn)展54-66
• 參考文獻(xiàn)63-66
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和在校期間發(fā)表論文66-67
• 致謝67

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 劉忠華;劉貽堯;楊紅;;超聲空化效應(yīng)和超聲微泡在生物醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用[J];生物技術(shù)通訊;2008年03期

2 趙應(yīng)征,張彥;微泡超聲造影劑的研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).藥學(xué)分冊(cè);2003年05期

3 程黎明,王思元,林菊生;PTEN和p53蛋白在肝癌組織中的表達(dá)及意義[J];癌癥;2003年01期

4 劉政,謝峰,李澎,王紅,劉梅,簡(jiǎn)文豪;肝臟VX_2腫瘤聲學(xué)造影的動(dòng)態(tài)變化時(shí)相[J];中華超聲影像學(xué)雜志;2000年06期

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本文編號(hào)：695379