本文關(guān)鍵詞：剛地弓形蟲DXR基因的克隆表達與生物學特性分析

  更多相關(guān)文章： 剛地弓形蟲 DXR 克隆表達 膦胺霉素

【摘要】：目的對剛地弓形蟲1-脫氧-D-木酮糖-5-磷酸還原異構(gòu)化酶(TgDXR)基因進行克隆、表達、純化和生物學特性分析。方法收集、純化RH株弓形蟲速殖子,提取cDNA和基因組DNA;PCR擴增TgDXR的基因片段;構(gòu)建成熟TgDXR/pET-24b重組原核表達載體;經(jīng)雙酶切、PCR及測序鑒定陽性克隆;在大腸桿菌BL21中用IPTG誘導表達。親和層析純化重組TgDXR蛋白,并對該蛋白的生物學特性和酶的動力學活性進行分析。結(jié)果從弓形蟲RH株的cDNA和基因組DNA中分別擴增出長度為1 542bp和5 464bp的TgDXR片段,成功構(gòu)建重組質(zhì)粒;SDS-PAGE結(jié)果表明,目的基因在大腸桿菌中高效表達。重組蛋白的相對分子量約50kDa。酶活性實驗顯示,Mg2+、Mn2+是最佳金屬螯合離子,反應(yīng)最佳pH值為7.5,該酶活性抑制劑膦胺霉素(Fosmidomycin)對該酶蛋白的IC50為0.52μmol/L。結(jié)論 RH株剛地弓形蟲TgDXR可在原核表達系統(tǒng)中高效表達,該重組蛋白具有生物學活性,并有望作為弓形蟲特異性藥物靶標。
【作者單位】： 武漢大學基礎(chǔ)醫(yī)學院醫(yī)學遺傳學系;武漢大學基礎(chǔ)醫(yī)學院人體寄生蟲學教研室;
【關(guān)鍵詞】： 剛地弓形蟲 DXR 克隆表達 膦胺霉素
【基金】：中央高�；究蒲袠I(yè)務(wù)費專項資金資助(No.2042015kf036)~~
【分類號】：R382.5
【正文快照】： 中央高�；究蒲袠I(yè)務(wù)費專項資金資助(No.2042015kf036)剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii)是一種專性細胞內(nèi)寄生的頂復(fù)門原蟲。弓形蟲病是一種危害十分嚴重的人獸共患寄生蟲病[1]。目前,該病治療尚無理想的特效藥物,主要以乙胺嘧啶和磺胺類藥物聯(lián)合應(yīng)用為主。尋求新型的活性高、

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 曾艷波;朱順海;韓紅玉;董輝;姜連連;趙其平;馬衛(wèi)嬌;程軍;黃兵;;抗急性弓形蟲病藥物療效的研究[J];中國人獸共患病學報;2011年04期

2 張瑞巖;劉全;商立民;吳永魁;;抗弓形蟲藥物研究進展[J];動物醫(yī)學進展;2010年01期

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 章瑩;宗紅英;何立;蔡國斌;;剛地弓形蟲DXR基因的克隆表達與生物學特性分析[J];中國人獸共患病學報;2016年12期

2 張婷鈺;張永納;信素華;劉曼曼;尚文然;趙貴山;李紅飛;;雞柔嫩艾美耳球蟲單卵囊的分離與純化[J];鄭州牧業(yè)工程高等�？茖W校學報;2015年04期

3 朱丙倫;曹杰;張厚雙;陳漢忠;周金林;;4種藥物治療弓形蟲Ⅲ型SHR蟲株感染的效果分析[J];中國獸醫(yī)學報;2015年10期

4 尹昆;寇景軒;王利磊;魏慶寬;趙桂華;黃炳成;徐超;李琛琛;朱嵩;閆歌;;靶向弓形蟲毒力決定因子Rop18激酶抑制劑的虛擬篩選[J];中國病原生物學雜志;2015年06期

5 張步彩;陶建平;蔣春茂;魏寧;王榮林;於敏;;5種中藥對急性感染弓形蟲小鼠的治療效果[J];中國獸醫(yī)學報;2015年07期

6 王旗;楊小迪;薛洪寶;陳興智;崔潔;陶莉;李倩;蘇胖胖;李江艷;胡守鋒;孫新;;金絲桃素對急性弓形蟲感染小鼠脾臟CD4~+和CD8~+T淋巴細胞亞群的影響[J];中國病原生物學雜志;2014年12期

7 張步彩;陶建平;蔣春茂;魏寧;於敏;;中藥復(fù)方制劑治療急性感染弓形蟲小鼠的效果研究[J];畜牧與獸醫(yī);2014年10期

8 王旗;楊雯;楊小迪;陳興智;;抗弓形蟲藥物的研究進展[J];中國病原生物學雜志;2014年05期

9 陳興智;楊雯;楊小迪;王旗;夏惠;劉剛;沈繼龍;;二(喹唑啉-4-基)二硒醚體外抗弓形蟲速殖子的實驗研究[J];中國人獸共患病學報;2013年07期

10 姚琳;劉婧陶;程瑤;鞠玉琳;;樺褐孔菌多糖對急性感染弓形蟲小鼠c-Jun、IL-12和IL-1β的影響研究[J];畜牧與獸醫(yī);2013年06期

【二級參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 董靖;鄧旭明;鄧彥宏;;抗寄生蟲新藥硝唑尼特研究進展[J];中國獸藥雜志;2010年05期

2 黃兵;朱順海;曾艷波;董輝;姜連連;韓紅玉;李洋;趙其平;平憲卿;程軍;;幾種藥物抗小鼠弓形蟲感染的初步效果[J];中國動物傳染病學報;2010年03期

3 陳才英;;大通縣家畜弓形蟲病流行病學調(diào)查[J];青海畜牧獸醫(yī)雜志;2008年01期

4 王世海;陳兆義;李安梅;唐麗娜;徐莉娜;林廣初;王秀珍;;貴州省人體重要寄生蟲病現(xiàn)狀調(diào)查與分析[J];中國病原生物學雜志;2007年06期

5 張可煜;王國永;薛飛群;;抗寄生蟲新藥硝唑尼特研究進展[J];獸醫(yī)導刊;2007年12期

6 馮超;薛飛群;張麗芳;孫海燕;;2-(4-氯-3-甲基苯基)-1,2,4-三嗪-3,5(2H,4H)-二酮的合成[J];中國醫(yī)藥工業(yè)雜志;2007年07期

7 米曉云;巴音查汗;李文超;;新疆豬、牛、羊弓形蟲病的血清學調(diào)查[J];中國獸醫(yī)寄生蟲病;2007年02期

8 楊秋林;許麗芳;桂慶軍;沈元瓊;徐剛;梁麗紅;陳揚勤;;紅霉素、阿奇霉素、磺胺嘧啶、大蒜素體外抗弓形蟲作用的研究[J];南華大學學報(醫(yī)學版);2007年01期

9 楊翠萍;萬紅嬌;;青蒿素及其衍生物抗弓形蟲的研究進展[J];國際醫(yī)學寄生蟲病雜志;2006年03期

10 馬運榮,孔曉燕;乙酰螺旋霉素治療弓形蟲感染的效果觀察[J];中國寄生蟲病防治雜志;2005年03期

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 Gross U ,李德發(fā);歐洲的剛地弓形蟲研究[J];國外醫(yī)學(寄生蟲病分冊);1997年04期

2 張恩英;剛地弓形蟲感染單核細胞后膜勢能的變化[J];國外醫(yī)學(寄生蟲病分冊);2002年04期

3 王曉黎,王冬冬,安春麗;剛地弓形蟲與性別:是必要的還是隨意選擇[J];國外醫(yī)學(寄生蟲病分冊);2004年03期

4 張潔;用小分子方法研究剛地弓形蟲的入侵機制[J];國外醫(yī)學(寄生蟲病分冊);2005年05期

5 李潤花;郝海霞;王海龍;孟曉麗;申金雁;殷國榮;;剛地弓形蟲肌動蛋白基因的克隆與表達[J];中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志;2013年05期

6 McLeod R ,程訓佳;剛地弓形蟲——細胞和分子生物學研究的新進展[J];國外醫(yī)學(寄生蟲病分冊);1992年01期

7 徐大為;剛地弓形蟲的嘧啶補救途徑[J];國外醫(yī)學(寄生蟲病分冊);1993年05期

8 毛佐華;剛地弓形蟲肌動蛋白解聚因子的克隆及特性[J];國外醫(yī)學(寄生蟲病分冊);1998年03期

9 王兆軍;γ-射線對孢子化與未孢子化的剛地弓形蟲的影響[J];國外醫(yī)學(寄生蟲病分冊);1999年01期

10 申川軍;阿聯(lián)酋主要地區(qū)兒童剛地弓形蟲病流行情況的血清學調(diào)查[J];國外醫(yī)學(寄生蟲病分冊);2003年06期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 楊瑞;侯玉英;趙晉英;劉智深;饒華祥;張淑萍;徐秀文;祝壽芬;郭劍津;;剛地弓形蟲感染對雄性小鼠性激素分泌和睪丸激素受體的影響[A];中華醫(yī)學會熱帶病與寄生蟲學分會機會性感染學術(shù)研討會論文匯編[C];2007年

2 侯玉英;楊瑞;趙晉英;劉智深;張淑萍;徐秀文;饒華祥;郭劍津;祝壽芬;;剛地弓形蟲感染對小鼠生精細胞凋亡的影響[A];中華醫(yī)學會熱帶病與寄生蟲學分會機會性感染學術(shù)研討會論文匯編[C];2007年

3 劉麗麗;;概述弓形蟲病及其研究進展[A];中華醫(yī)學會第八次全國檢驗醫(yī)學學術(shù)會議暨中華醫(yī)學會檢驗分會成立30周年慶典大會資料匯編[C];2009年

4 張理航;邵國青;劉茂軍;呂芳;李賀俠;吳敘蘇;馮志新;;剛地弓形蟲NT株P(guān)30基因的克隆與表達[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜寄生蟲學分會第六次代表大會暨第十次學術(shù)研討會論文集[C];2009年

5 吳q;陳曉光;彭鴻娟;李華;;剛地弓形蟲SAG1基因的克隆及在大腸桿菌中的初步表達[A];中國動物學會第七屆全國青年寄生蟲學工作者學術(shù)討論會論文摘要集[C];2002年

6 張理航;劉茂軍;呂芳;李賀俠;吳敘蘇;馮志新;邵國青;;剛地弓形蟲NT株P(guān)30基因的克隆與表達[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物傳染病學分會第三屆豬病防控學術(shù)研討會論文集[C];2008年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 葛以躍;NK細胞的TLR/MyD88信號通路在剛地弓形蟲感染早期IFN-γ產(chǎn)生過程中的作用研究[D];南京醫(yī)科大學;2013年

2 付永鋒;抗剛地弓形蟲特異性人源抗體Fab片段的制備和研究[D];復(fù)旦大學;2008年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 蘇丹華;剛地弓形蟲Prx體外抗氧化機制研究[D];江蘇大學;2016年

2 程維晟;基于二代測序的剛地弓形蟲Chinese 1基因型不同毒力蟲株的變異檢測[D];安徽醫(yī)科大學;2016年

3 孫敏;剛地弓形蟲14-3-3蛋白真核表達載體的構(gòu)建與表達[D];山東大學;2013年

4 王芬;剛地弓形蟲磷酸甘油酸變位酶2基因的生物信息學分析、克隆表達及免疫保護性研究[D];山西醫(yī)科大學;2011年

5 岳紅霞;長春地區(qū)孕婦弓形蟲感染蟲株的基因分型[D];吉林大學;2011年

6 孔t，

本文編號：690612