本文關(guān)鍵詞：剛地弓形蟲(chóng)DXR基因的克隆表達(dá)與生物學(xué)特性分析

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【摘要】：目的對(duì)剛地弓形蟲(chóng)1-脫氧-D-木酮糖-5-磷酸還原異構(gòu)化酶(TgDXR)基因進(jìn)行克隆、表達(dá)、純化和生物學(xué)特性分析。方法收集、純化RH株弓形蟲(chóng)速殖子,提取cDNA和基因組DNA;PCR擴(kuò)增TgDXR的基因片段;構(gòu)建成熟TgDXR/pET-24b重組原核表達(dá)載體;經(jīng)雙酶切、PCR及測(cè)序鑒定陽(yáng)性克隆;在大腸桿菌BL21中用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。親和層析純化重組TgDXR蛋白,并對(duì)該蛋白的生物學(xué)特性和酶的動(dòng)力學(xué)活性進(jìn)行分析。結(jié)果從弓形蟲(chóng)RH株的cDNA和基因組DNA中分別擴(kuò)增出長(zhǎng)度為1 542bp和5 464bp的TgDXR片段,成功構(gòu)建重組質(zhì)粒;SDS-PAGE結(jié)果表明,目的基因在大腸桿菌中高效表達(dá)。重組蛋白的相對(duì)分子量約50kDa。酶活性實(shí)驗(yàn)顯示,Mg2+、Mn2+是最佳金屬螯合離子,反應(yīng)最佳pH值為7.5,該酶活性抑制劑膦胺霉素(Fosmidomycin)對(duì)該酶蛋白的IC50為0.52μmol/L。結(jié)論 RH株剛地弓形蟲(chóng)TgDXR可在原核表達(dá)系統(tǒng)中高效表達(dá),該重組蛋白具有生物學(xué)活性,并有望作為弓形蟲(chóng)特異性藥物靶標(biāo)。
【作者單位】： 武漢大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)系;武漢大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院人體寄生蟲(chóng)學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 剛地弓形蟲(chóng) DXR 克隆表達(dá) 膦胺霉素
【基金】：中央高校基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專(zhuān)項(xiàng)資金資助(No.2042015kf036)~~
【分類(lèi)號(hào)】：R382.5
【正文快照】： 中央高�；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)專(zhuān)項(xiàng)資金資助(No.2042015kf036)剛地弓形蟲(chóng)(Toxoplasma gondii)是一種專(zhuān)性細(xì)胞內(nèi)寄生的頂復(fù)門(mén)原蟲(chóng)。弓形蟲(chóng)病是一種危害十分嚴(yán)重的人獸共患寄生蟲(chóng)病[1]。目前,該病治療尚無(wú)理想的特效藥物,主要以乙胺嘧啶和磺胺類(lèi)藥物聯(lián)合應(yīng)用為主。尋求新型的活性高、

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6 孔t，

本文編號(hào)：690612