本文關(guān)鍵詞：雞卵清蛋白基因調(diào)控序列的克隆與載體構(gòu)建

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【摘要】：卵清蛋白(ovalbumin)基因在雞基因組中只有一對(duì)等位基因,卻能每天合成分泌多達(dá)2 g的蛋白,占據(jù)卵白蛋白質(zhì)的50%以上,是外源基因載體表達(dá)調(diào)控構(gòu)件的首選。該研究從輸卵管特異性啟動(dòng)子方面著手,通過(guò)對(duì)卵清蛋白基因啟動(dòng)子的篩選優(yōu)化,找出啟動(dòng)子增強(qiáng)因子的位置以及組織特異性區(qū)域。將卵清蛋白基因上游-922~-2 073和-2 801~-3 100區(qū)域平均分成12個(gè)長(zhǎng)度約為150 bp的序列,分別插入到-921~+38序列的上游,成功構(gòu)建12個(gè)系列表達(dá)載體,為進(jìn)一步篩選短縮版優(yōu)化啟動(dòng)子提供材料;卵清蛋白基因第一內(nèi)含子區(qū)域截?cái)喑?00 bp左右的迷你內(nèi)含子序列,成功構(gòu)建8個(gè)迷你內(nèi)含子系列載體,為篩選優(yōu)化的迷你內(nèi)含子提供必要的材料;成功分離雞輸卵管上皮細(xì)胞并優(yōu)化電轉(zhuǎn)染條件,通過(guò)熒光素酶活性檢測(cè)初步篩選出具有最強(qiáng)活性重組質(zhì)粒pGL4-UP-1412和內(nèi)含子重組質(zhì)粒pGL4-mini-intron-3,同時(shí)推斷出若干包含增強(qiáng)子序列區(qū)域。
【作者單位】： 浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所;
【關(guān)鍵詞】： 卵清蛋白基因 調(diào)控序列 載體 熒光素酶活性
【基金】：浙江省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(LQ12C17002)
【分類號(hào)】：S831;Q78
【正文快照】： 卵清蛋白(Ovalbumin)在雞基因組中只有一對(duì)等位基因,卻能每天合成分泌多達(dá)2 g的蛋白,占據(jù)卵白蛋白質(zhì)的50%以上,自然成為外源基因載體表達(dá)調(diào)控構(gòu)件的首選。至今,以家禽輸卵管定位表達(dá)為目標(biāo)的基因?qū)胙芯?絕大部分采用了卵清蛋白基因的調(diào)控序列。然而,即便采用了卵清蛋白的調(diào)

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