本文關(guān)鍵詞：青魚γ-干擾素基因的克隆與表達(dá)分析

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【摘要】：【目的】開展青魚γ-干擾素(IFN-γ)基因的克隆、結(jié)構(gòu)特征與表達(dá)譜分析研究�！痉椒ā坎捎胏DNA末端快速擴增技術(shù)獲得了青魚(Mylopharyngodon piceus)IFN-γ基因cDNA的5′和3′末端序列,然后根據(jù)其末端序列設(shè)計特異性引物,擴增得到青魚IFN-γ基因cDNA全長序列,對其序列和編碼氨基酸序列進(jìn)行生物信息學(xué)、同源性比較及系統(tǒng)進(jìn)化樹分析,同時對其在青魚各組織中的表達(dá)進(jìn)行分析。通過構(gòu)建真核表達(dá)載體,將其轉(zhuǎn)染青魚鰭條組織細(xì)胞進(jìn)行表達(dá)分析�！窘Y(jié)果】青魚IFN-γcDNA全長為895bp,其開放閱讀框大小為549bp,編碼182個氨基酸。氨基酸序列比對分析結(jié)果顯示,青魚IFN-γ與人、雞、鼠IFN-γ的序列相似性僅為1.5%~7.7%,與其他魚類IFN-γ序列相似性較高,為16.3%~92.9%。青魚IFN-γ分子N末端包含1個信號肽序列、C末端有IFN-γ特征序列([I/V]-QX-[K/Q]-A-X2-E-[L/F]-X2-[I/V])以及核定位基序(RRRR)。青魚IFN-γ蛋白二級結(jié)構(gòu)與高等脊椎動物IFN-γ類似,包含7個α螺旋結(jié)構(gòu)。經(jīng)Poly I:C誘導(dǎo)后發(fā)現(xiàn),IFN-γ在青魚頭腎、腎、脾、皮膚和鰓組織中表達(dá)顯著上調(diào),最高的為頭腎,其次為脾、皮膚、鰓和腎,而在心臟和腦組織中無顯著變化。青魚γ-干擾素真核表達(dá)質(zhì)粒在青魚鰭條組織細(xì)胞中成功表達(dá)IFN-γ�！窘Y(jié)論】成功克隆了青魚IFN-γ基因cDNA,經(jīng)Poly I:C誘導(dǎo)后,該基因在頭腎中上調(diào)倍數(shù)最為顯著,青魚γ-干擾素在體外獲得表達(dá)。
【作者單位】： 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院長江水產(chǎn)研究所;湖州師范學(xué)院浙江省水生生物資源養(yǎng)護(hù)與開發(fā)技術(shù)研究重點實驗室;華中農(nóng)業(yè)大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院;上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 青魚 IFN-γ基因 結(jié)構(gòu)特征 表達(dá)分析
【基金】：國家“大宗淡水魚產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項”(CARS-46-11) 浙江省水生生物資源養(yǎng)護(hù)與開發(fā)技術(shù)研究重點實驗室開放基金項目(SS201403)
【分類號】：S917.4
【正文快照】： 干擾素(IFN)是一類能夠誘導(dǎo)脊椎動物細(xì)胞產(chǎn)生抗病毒蛋白的分泌型細(xì)胞因子,可分為Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型3種[1]。其中,Ⅱ型干擾素即γ-干擾素(INF-γ),主要由NK細(xì)胞產(chǎn)生,也可由單核吞噬細(xì)胞及抗原提呈細(xì)胞分泌的IL-12和IL-18刺激T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生[2-4]。IFN-γ能誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生毒性物，

本文編號：687028