本文關(guān)鍵詞：蜜蜂NADPH-細胞色素P450還原酶基因在大腸桿菌中的表達及酶學(xué)特性分析

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【摘要】：10-羥基-2-癸烯酸(10-HDA)是蜂王漿中的主要脂肪酸成分,具有抗菌、抗癌、延緩衰老等多種生理活性,但目前關(guān)于10-HDA生物合成的分子機制還不清楚。通過克隆蜜蜂NADPH-細胞色素P450還原酶(EC 1.6.2.4,NADPH-cytochrome P450 reductase,CPR),在大腸桿菌中異源表達,并對其酶學(xué)特性進行分析。結(jié)果表明重組菌經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后表達蛋白的分子量與預(yù)期一致,為86.29 kDa,Ni-NTA親和純化后測得其比活性為77.33(EU of CPR)/μg。酶學(xué)性質(zhì)分析結(jié)果表明蜜蜂CPR酶最適溫度與pH分別為40℃和8.0,并對一些金屬離子及有機溶劑具有不同程度的耐受性。其對底物細胞色素C的動力學(xué)參數(shù)Km和kcat分別為76μM和268/min。以上研究為探究CPR在10-HDA生物合成途徑中的功能奠定理論基礎(chǔ)。
【作者單位】： 山東省齊魯工業(yè)大學(xué)生物工程學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： NADPH-細胞色素P還原酶 大腸桿菌 異源表達 酶學(xué)特性
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31201281,31171727) 山東省自主創(chuàng)新及成果轉(zhuǎn)化專項(201422CX02602)資助項目
【分類號】：Q55;Q78
【正文快照】： NADPH(煙酰胺腺嘌呤二核苷酸)-細胞色素P450還原酶是一類以FMN(黃素單核苷酸)和FAD(黃素腺嘌呤二核苷酸)為輔基的氧化還原酶,是細胞色素P450酶系(Cytochrome P450 enzymes system,P450s)的重要組成部分[1],普遍存在于動物、微生物、昆蟲及植物等生物體中。研究表明,動物、昆蟲

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