本文關(guān)鍵詞：SK2和JPH2雙基因重組真核表達(dá)載體的構(gòu)建及在HEK293細(xì)胞中的表達(dá)

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【摘要】：目的:構(gòu)建SK2和JPH2雙基因重組真核表達(dá)載體p IRES-EGFP/SK2+JPH2,并檢測(cè)其在轉(zhuǎn)染后HEK293細(xì)胞中的表達(dá)。方法:以p CMV6-entry/SK2為模板,PCR擴(kuò)增出SK2片段,通過(guò)BgⅢ/HindⅢ酶切位點(diǎn)克隆入真核表達(dá)載體p IRES-EGFP,將JPH2序列插入構(gòu)建的SK2表達(dá)載體p IRES-EGFP-SK2,并通過(guò)酶切及測(cè)序鑒定。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將重組質(zhì)粒p IRES-EGFP/SK2+JPH2轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞,采用Western blot法檢測(cè)SK2通道蛋白和JPH2蛋白的表達(dá)。結(jié)果:構(gòu)建的重組真核表達(dá)載體p IRES-EGFP/SK2+JPH2經(jīng)酶切和測(cè)序鑒定,證實(shí)插入的序列與Gen Bank中的SK2和JPH2基因序列完全相同。p IRES-EGFP/SK2+JPH2質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞48 h后,SK2和JPH2蛋白均能成功表達(dá)。結(jié)論:成功構(gòu)建了重組真核表達(dá)載體p IRES-EGFP/SK2+JPH2。
【作者單位】： 鄭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生理學(xué)教研室;新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： SK通道 JPH蛋白 真核表達(dá)載體 HEK
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目 81270248;81570311
【分類號(hào)】：Q78
【正文快照】： #通信作者,女,1957年10月生,博士,教授,研究方向:心臟生理學(xué),E-mail:qianzhang@zzu.edu.cn小電導(dǎo)-鈣激活鉀通道(small conductance calci-um activated potassium channel,SK channel)幾乎可表達(dá)于所有可興奮細(xì)胞[1]。SK2通道是心肌細(xì)胞的一種依賴鈣離子激活的鉀通道,在心肌細(xì)

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本文編號(hào)：680148