本文關(guān)鍵詞：實時熒光定量PCR法檢測轉(zhuǎn)基因豬外源基因整合拷貝數(shù)

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【摘要】：以GFP轉(zhuǎn)基因豬為研究對象,以轉(zhuǎn)鐵蛋白受體基因為內(nèi)參基因,通過SYBR GreenⅠ實時熒光定量PCR建立針對外源基因GFP和內(nèi)參基因的雙標準曲線和方程。對轉(zhuǎn)基因豬基因組DNA中外源基因和內(nèi)參基因的拷貝數(shù)同時定量檢測,外源基因與內(nèi)參基因起始模板拷貝數(shù)的比值即為外源基因在轉(zhuǎn)基因豬中的整合拷貝數(shù)。同時,利用Southern-blot進行驗證分析。結(jié)果顯示:實時熒光定量PCR法檢測2頭轉(zhuǎn)基因陽性豬外源基因拷貝數(shù)分別為3和2,2頭轉(zhuǎn)基因陰性豬外源基因拷貝數(shù)均為0,結(jié)果同Southern-blot檢測一致。結(jié)果表明:實時熒光定量PCR法高通量、靈敏、方便,可以更好的用于轉(zhuǎn)基因豬外源基因整合拷貝數(shù)的檢測。
【作者單位】： 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院;山東省動物生物工程與疾病防治重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 熒光定量PCR 轉(zhuǎn)基因豬 拷貝數(shù)
【基金】：國家轉(zhuǎn)基因重大專項(2013ZX08006-002,2011ZX08006-002) 山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)(生豬)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(SDAIT-06-022-03) 山東省農(nóng)業(yè)良種工程重大課題(2013LZ02-015)
【分類號】：S828
【正文快照】： 動植物轉(zhuǎn)基因是建立動植物模型、品種改良和基因功能驗證的常用方法。但在轉(zhuǎn)基因動植物中,外源基因整合拷貝數(shù)通常會影響目的基因表達水平,同時會影響轉(zhuǎn)基因動植物的遺傳穩(wěn)定性[1-6]。因此,在轉(zhuǎn)基因的相關(guān)研究中,外源基因拷貝數(shù)的檢測不僅成為關(guān)鍵的環(huán)節(jié),還一直是個難題。Sout

【相似文獻】

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