發(fā)布時(shí)間：2017-08-12 20:25

  本文關(guān)鍵詞：枯草芽孢桿菌QM11漆酶基因克隆表達(dá)及序列分析

  更多相關(guān)文章： 枯草芽孢桿菌 漆酶 基因克隆 序列分析 表達(dá)載體構(gòu)建 誘導(dǎo)表達(dá)

【摘要】：為獲得高效表達(dá)的產(chǎn)漆酶工程菌,將枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的漆酶(cotA)基因在大腸桿菌中表達(dá)。用PCR的方法從枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)QM11基因組中擴(kuò)增cotA基因,連接載體pET22b構(gòu)建成表達(dá)載體pET22b-cotA,轉(zhuǎn)化至E.coli BL21(DE3)進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),最終通過(guò)SDS-PAGE檢測(cè)蛋白表達(dá)情況。克隆得到的cotA基因含有1542個(gè)核苷酸,由513個(gè)氨基酸組成,預(yù)測(cè)相對(duì)分子量為58 ku,理論等電點(diǎn)為5.91,無(wú)信號(hào)肽,二級(jí)結(jié)構(gòu)以β-折疊和無(wú)規(guī)卷曲為主,其中β-折疊占26.71%,無(wú)規(guī)卷曲占52.05%,與NCBI已公布的Bacillus subtilis漆酶cotA基因(Gen Bank:GQ184294.1)堿基序列有12個(gè)堿基的差異,其編碼的氨基酸序列有4個(gè)發(fā)生了改變。通過(guò)SDS-PAGE檢測(cè),目標(biāo)蛋白相對(duì)分子質(zhì)量約為54 ku,與預(yù)測(cè)相對(duì)分子量基本相符。
【作者單位】： 哈爾濱商業(yè)大學(xué)食品工程學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 枯草芽孢桿菌 漆酶 基因克隆 序列分析 表達(dá)載體構(gòu)建 誘導(dǎo)表達(dá)
【基金】：哈爾濱商業(yè)大學(xué)研究生創(chuàng)新科研項(xiàng)目(JYSCX2014-333HSD)
【分類(lèi)號(hào)】：Q78;Q936
【正文快照】： 漆酶(EC 1.10.3.2)是一種含銅的多酚氧化酶,能夠催化多種酚類(lèi)化合物氧化,同時(shí)將分子氧還原為水[1],廣泛應(yīng)用于造紙及食品工業(yè)等。秸稈是我國(guó)主要的農(nóng)業(yè)廢棄物[2],主要由木質(zhì)素、纖維素和半纖維素組成,秸稈降解的關(guān)鍵就是處理包裹在纖維素和半纖維素外面的木質(zhì)素[3]。木質(zhì)素是

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2 鄭U，

本文編號(hào)：663485