本文關(guān)鍵詞：雞miR-17-92基因簇上游調(diào)控區(qū)功能分析

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【摘要】：miR-17-92基因簇(miR-17-92 cluster)在細(xì)胞增殖、分化、凋亡、動(dòng)物發(fā)育以及腫瘤發(fā)生等過(guò)程中發(fā)揮重要作用。目前,人和小鼠等哺乳動(dòng)物miR-17-92基因簇的轉(zhuǎn)錄調(diào)控已有深入研究,但該基因簇在雞等鳥(niǎo)類中的轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究還未見(jiàn)報(bào)道,主要原因在于鳥(niǎo)類miR-17-92基因簇上游的基因組序列都存在一個(gè)gap,且該基因簇啟動(dòng)子的位置和序列也還不清楚。為此,本研究采用染色體步移的方法獲得雞miR-17-92基因簇上游gap區(qū)序列,并采用生物信息學(xué)分析和報(bào)告基因及截短突變技術(shù)開(kāi)展該gap區(qū)的功能分析。染色體步移分析發(fā)現(xiàn),雞miR-17-92基因簇上游gap區(qū)全長(zhǎng)1704 bp,GC含量達(dá)80.11%。生物信息學(xué)分析顯示,雞miR-17-92基因簇上游gap區(qū)內(nèi)1段200 bp的序列與人、牛、小鼠等9種動(dòng)物miR-17-92基因簇上游序列保守性較高,且該區(qū)域?yàn)槿撕托∈蟮炔溉閯?dòng)物miR-17-92基因簇宿主基因的核心啟動(dòng)子區(qū)。將克隆的gap區(qū)序列插入pGL3 basic熒光素酶報(bào)告基因載體,構(gòu)建成啟動(dòng)子熒光素酶報(bào)告基因載體pGL3-cMIR17HG(-4228/-2506)。熒光素酶報(bào)告基因活性分析表明,p GL3-c MIR17HG(-4228/-2506)報(bào)告基因的活性是pGL3 basic空載體活性的417倍,證明所克隆的gap區(qū)片段是雞miR-17-92基因簇宿主基因的啟動(dòng)子。為進(jìn)一步分析該啟動(dòng)子的結(jié)構(gòu)和功能,構(gòu)建gap區(qū)片段的5'端缺失突變(缺失448 bp)和3'端缺失突變(缺失894 bp)的熒光素酶報(bào)告基因載體。與pGL3-cMIR17HG(-4228/-2506)相比,5'端和3'端缺失突變分別使啟動(dòng)子報(bào)告基因活性降低19.82%和60.14%。這些數(shù)據(jù)提示,雞miR-17-92基因簇宿主基因啟動(dòng)子的重要調(diào)控區(qū)位于-3400/-2506。本研究結(jié)果為進(jìn)一步開(kāi)展雞miR-17-92基因簇的轉(zhuǎn)錄調(diào)控奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 農(nóng)業(yè)部雞遺傳育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;黑龍江省普通高等學(xué)校動(dòng)物遺傳育種與繁殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 雞 miR--基因簇 啟動(dòng)子 轉(zhuǎn)錄調(diào)控
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(編號(hào):31372299) 農(nóng)業(yè)部產(chǎn)業(yè)體系項(xiàng)目(編號(hào):CARS-42)資助~~
【分類號(hào)】：Q78;S831
【正文快照】： 2.黑龍江省普通高等學(xué)校動(dòng)物遺傳育種與繁殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,哈爾濱150030;3.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院,哈爾濱150030mi R-17-92基因簇(mi R-17-92 cluster)在細(xì)胞增殖、分化、凋亡、動(dòng)物發(fā)育以及腫瘤發(fā)生等過(guò)程中發(fā)揮重要作用。目前,人和小鼠等哺乳動(dòng)物mi R-17-92基因簇的轉(zhuǎn)錄

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