本文關(guān)鍵詞：半滑舌鰨TLR5S三種剪切型基因的克隆與表達(dá)分析

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【摘要】：Toll樣受體5(Toll-like receptor 5,TLR5)是TLRs家族成員之一,可分為跨膜型TLR5M和魚類特有的可溶型TLR5S,它們可以識別致病菌表面的鞭毛蛋白并協(xié)同作用激活免疫反應(yīng)。為了研究半滑舌鰨受到病原感染后TLR5S參與免疫反應(yīng)的作用,本研究使用RACE技術(shù)獲得了半滑舌鰨(Cynoglossus semilaevis)TLR5S全長c DNA序列。TLR5S c DNA有3種剪切型:Cs.TLR5S x1,Cs.TLR5S x2和Cs.TLR5S x3。這3種剪切型的相同區(qū)域為308 bp 5′非編碼區(qū)(5′UTR)和1701 bp開放閱讀框(ORF),不同的3′UTR分別為138 bp、364 bp和637 bp。Cs.TLR5S共編碼567個氨基酸,預(yù)測編碼蛋白質(zhì)分子量為64.03 k D,等電點為8.49。氨基酸多重序列比對結(jié)果顯示,Cs.TLR5S氨基酸序列與其他脊椎動物TLR5S氨基酸序列具有較高的相似性,其中與牙鲆相似度高達(dá)61%,表明Cs.TLR5S在進(jìn)化上的具有一定的保守性。Real-time PCR結(jié)果表明該基因在半滑舌鰨的不同組織均有表達(dá),其中在肝的表達(dá)量最高,在脾的表達(dá)量最低。此外,檢測Cs.TLR5S 3′端的不同剪切型在肝、脾、頭腎、小腸中的表達(dá),結(jié)果顯示Cs.TLR5S x3只在肝中高表達(dá),而Cs.TLR5S x1則在肝和小腸中都有中等程度表達(dá)。鰻弧菌(Vibrio anguillarum)感染半滑舌鰨實驗表明,注射菌液6 h后,Cs.TLR5S基因在腎、小腸、肝和脾4個組織中的表達(dá)量都有顯著上升;注射鰻弧菌48 h后,以上4種組織中表達(dá)量均呈現(xiàn)降低的變化。上述實驗結(jié)果說明,Cs.TLR5S基因可能參與了半滑舌鰨抗弧菌感染的免疫反應(yīng)。
【作者單位】： 大連海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院;中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所農(nóng)業(yè)部海洋漁業(yè)資源重點實驗室;青島海洋科學(xué)與技術(shù)國家實驗室海洋漁業(yè)科學(xué)與食物產(chǎn)出過程功能實驗室;上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 半滑舌鰨 TLRS 鰻弧菌 基因克隆 表達(dá)
【基金】：國家自然科學(xué)基金重點項目(31530078) 山東省泰山學(xué)者攀登計劃專項
【分類號】：S917.4
【正文快照】： Toll樣受體(Toll-like receptors,TLRs)是一類位于細(xì)胞膜上的病原相關(guān)分子模式(pathogen-associated molecular pattern,PAMP)的識別受體,能夠直接識別或通過抗原呈遞細(xì)胞(antigen-presenting cell,APC)識別外源病原微生物中的脂多糖(LPS)、肽聚糖、雙鏈RNA、鞭毛蛋白(flagell

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