發(fā)布時間：2017-08-08 22:22

  本文關鍵詞：轉(zhuǎn)染人TBX18基因的大鼠心臟成纖維細胞中HCN4蛋白表達、If及對心肌細胞搏動頻率的影響觀察

  更多相關文章： TBX基因 基因轉(zhuǎn)染 成纖維細胞 心肌細胞 超級化激活環(huán)核苷酸門控陽離子通道 超極化激活內(nèi)向離子電流 心臟起博 動物實驗

【摘要】：目的觀察轉(zhuǎn)染人TBX18基因的大鼠心臟成纖維細胞HCN4蛋白表達、超極化激活內(nèi)向離子電流(If)及對心肌細胞搏動頻率的影響。方法取新生SD大鼠,斷頭處死后取心臟,分離培養(yǎng)成纖維細胞及心肌細胞。構(gòu)建人TBX18基因的腺病毒載體Ad-GFP-TBX18,包裝并純化病毒滴度至1×1010TU/m L。取傳代2~5代時對數(shù)生長期新生大鼠成纖維細胞分為A、B、C組,培養(yǎng)24 h后A、B組分別轉(zhuǎn)染Ad-GFP-TBX18、腺病毒載體p HBAd-MCMV-GFP(陰性對照),C組不做任何處理。采用RT-PCR法檢測各組細胞TBX18 mRNA。采用Western blotting法檢測各組超極化激活環(huán)核苷酸門控陽離子通道4(HCN4)蛋白。采用電壓鉗記錄各組細胞超極化激活內(nèi)向離子電流(If)。將各組細胞與新生大鼠心肌細胞共培養(yǎng),觀察新生大鼠心肌細胞搏動頻率。結(jié)果 A、B、C組TBX18 mRNA相對表達量分別為98.32±6.21、1.03±0.05、1.02±0.02。A組TBX18 mRNA相對表達量高于B、C組(P均0.05);B、C組TBX18mRNA相對表達量差異無統(tǒng)計學意義。A、B、C組HCN4蛋白相對表達量分別為0.49±1.21、0.12±0.02、0.09±0.01。A組HCN4蛋白相對表達量高于B、C組(P均0.05);B、C組HCN4蛋白相對表達量差異無統(tǒng)計學意義。A組約有30%的細胞可以檢測到If,而B、C組中沒有細胞檢測到If。同一時點A組新生大鼠心肌細胞搏動頻率高于B、C組(P均0.05);B、C組新生大鼠心肌細胞搏動頻率差異無統(tǒng)計學意義。結(jié)論轉(zhuǎn)染人TBX18基因的大鼠心臟成纖維細胞高表達HCN4蛋白,存在If電流,并能促進共培養(yǎng)新生大鼠心肌細胞的搏動。
【作者單位】： 武漢大學人民醫(yī)院;武漢大學心血管研究所;湖北省心血管重點實驗室;十堰市太和醫(yī)院;
【關鍵詞】： TBX基因 基因轉(zhuǎn)染 成纖維細胞 心肌細胞 超級化激活環(huán)核苷酸門控陽離子通道 超極化激活內(nèi)向離子電流 心臟起博 動物實驗
【基金】：國家自然科學基金面上項目(81270249);國家自然科學基金面上項目(81570306) 湖北省科技支撐計劃項目(2013BCB013)
【分類號】：R541.7
【正文快照】： 3湖北省心血管重點實驗室;4十堰市太和醫(yī)院)近年來,緩慢性心律失常的發(fā)病率逐年升高。安裝心臟起搏器可緩解癥狀,但起搏器不能隨患者情緒變化、激烈運動情況做出自主調(diào)節(jié),且有需定期更換電池、易受電磁波干擾及不適合兒童使用等缺點,因此尋找替代療法生物起搏器逐漸成為了研究

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