本文關鍵詞：枳抗逆基因的克隆及功能鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《華中農業(yè)大學》 2006年

枳PPF-1同源基因的克隆及表達特性分析

羅海瀾  

【摘要】： 柑橘是我國的主栽果樹之一。以枳(Poncirus trifoliata(L．)Raf．)為遺傳資源培育抗性柑橘新種質是柑橘育種的主要內容之一。PPF-1是與開花、衰老及逆境有關的基因，本研究克隆了枳PPF-1同源基因PtPPF-1，并對其表達特性進行了分析。主要結果如下： 根據豌豆PPF-1、擬南芥ALBINO3的cDNA全長序列比對結果設計引物，通過RT-PCR及3′-RACE擴增得到了枳PPF-1同源基因的cDNA克隆片段(命名PtPPF-1)，該基因全長1493bp，編碼一條長452個氨基酸殘基的多肽，理論分子量為125.1kD，等電點為4.92。經蛋白結構預測發(fā)現其含有一個長為36個氨基酸殘基的葉綠體定位信號域和五個跨膜結構域。氨基酸序列比對表明，，PtPPF-1與豌豆PPF-1、擬南芥ALBINO3、水稻PPF-1相似性較高，與衣藻ALB3.2、性原細胞ALB3-1、綠領鞭藻類ALBINO3等同源蛋白相似性相對較低。 系統(tǒng)發(fā)育分析表明，PtPPF-1與豌豆PPF-1親緣關系最近，其次為擬南芥ALBINO3和水稻PPF-1，四者同屬一小族，說明PPF-1基因在進化過程中可能變異較小。 采用半定量RT-PCR對PtPPF-1的表達特性進行了分析。結果表明，PtPPF-1的表達量在枳葉片中最高，頂芽中次之，再次為莖，在根中沒有檢測到表達；而其紅橘(Citrus tangerine Hort．ex Tanaka)的PPF-1同源基因在頂芽、葉片和莖中的表達沒有差別。說明PtPPF-1的表達不僅具有組織特異性，而且種屬間也存在差異。這可能與PtPPF-1基因含有葉綠體定位信號肽有關及枳抗性有關。 對不同植物生長調節(jié)劑處理枳葉中PtPPF-1表達情況進行了分析，結果表明GA_3、IAA、ABA促進了PtPPF-1的表達，KT對PtPPF-1的表達有抑制作用。推測GA_3、IAA、ABA信號通路可能與KT信號通路作用于PtPPF-1的表達存在不同的機制。PtPPF-1可能作為植物生長調節(jié)劑信號因子的一個下游信號元件存在，參與信號傳導。 采用半定量RT-PCR對非生物脅迫(低溫、干旱、鹽)下枳的生理指標及PtPPF-1的表達情況進行了分析。結果表明，這三種脅迫都能誘導PtPPF-1的表達。說明PtPPF-1基因能響應這三種脅迫。SOD、POD活性在三種脅迫中均較高，CAT活性在三種脅迫中處于低水平；脯氨酸含量在三種脅迫中均表現為持續(xù)上升。三種脅迫中尤其是低溫脅迫SOD、POD活性及脯氨酸含量的變化趨勢與PtPPF-1的表達有很大的相似性，推測PtPPF-1基因可能與SOD、POD及脯氨酸之間存在一定的聯系，并可以作為逆境脅迫標志物。

【關鍵詞】：
【學位授予單位】：華中農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：S666
【目錄】：

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