本文關鍵詞：鐵皮石斛HDS基因的克隆與初步表達分析

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【摘要】：目的從鐵皮石斛Dendrobium officinale中克隆4-羥基-3-甲基-2-E-丁烯基-1-焦磷酸合成酶(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-1-yl diphosphate synthase,HDS)基因,在大腸桿菌中誘導融合蛋白,并探究該基因在鐵皮石斛不同組織中的表達規(guī)律。方法采用RT-PCR和RACE等方法獲取鐵皮石斛HDS(Do HDS)的c DNA全長,利用相關軟件和在線網(wǎng)站進行生物信息學分析,使用Real-Time PCR分析Do HDS在不同組織的表達特征,構建原核表達載體p ET-28a(+)-Do HDS,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)進行誘導表達。結(jié)果成功獲得Do HDS的c DNA全長序列,Gen Bank登錄號為KJ161312,全長2 666 bp,ORF為2 238 bp,編碼745個氨基酸。Do HDS在各組織中均有表達,在莖中表達量最高,為原球莖的5倍;SDS-PAGE結(jié)果顯示誘導產(chǎn)物為1個相對分子質(zhì)量(82 700)與理論值相符的融合蛋白。結(jié)論克隆了Do HDS的c DNA全長序列,探究其在不同組織中的表達模式,建立了原核表達體系,為后續(xù)研究Do HDS的功能提供了一定的理論基礎。
【作者單位】： 安徽農(nóng)業(yè)大學生命科學學院;
【關鍵詞】： 鐵皮石斛 -羥基--甲基--E-丁烯基--焦磷酸合酶 基因克隆 表達分析
【基金】：安徽省教育廳自然科學重點項目(KJ2015A005) 江淮地區(qū)大學農(nóng)業(yè)科技服務模式關鍵技術集成與示范(2013BAD20B09)
【分類號】：S567.239
【正文快照】： 鐵皮石斛Dendrobium officinale Kimura et Migo,又名黑節(jié)草,多年生草本植物,為蘭科第2大屬植物。它是一種常用名貴中藥[1],至今已有1 500多年藥用歷史。歷代醫(yī)著如《道藏》《神農(nóng)本草經(jīng)》《本草綱目拾遺》等均有記載[2]�！吨袊幍洹�2010年版中記載鐵皮石斛具有益胃生津、滋

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本文編號：641050