本文關鍵詞：肝移植患者外周血中藥物代謝酶基因表達的研究

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【摘要】：目的:研究肝移植患者術后外周血中藥物代謝酶基因表達情況,探究在肝移植術后將檢測藥物代謝酶基因表達量應用于預測肝損傷,從而進一步指導臨床用藥。方法:選取2013年10月~2014年4月在天津市第一中心醫(yī)院進行肝移植的患者64例,64例患者均采用三聯免疫抑制治療方案。采集患者術后三周的外周血,對收集到的臨床數據采用非線性混合效應模型(Nonlinear Mixed Effect Model,NONMEM)進行分析,發(fā)現他克莫司的清除率主要受總膽紅素、血紅蛋白、術后時間、血尿素氮的影響,除了上述指標外還將白蛋白、總蛋白指標納入研究。首先從術后三周的樣本中篩選出8例,根據他克莫司不同的血藥濃度分為兩組:血藥濃度高組和血藥濃度低組;提取外周血中RNA逆轉成c DNA,采用RT2Profiler PCR Array篩查兩組差異表達的基因;采用64例樣本驗證RT2 Profiler PCR Array結果;采用重組人源CYP酶實驗驗證表達發(fā)生變化的基因與免疫抑制劑的代謝關系;采用i MLDR技術對與抑制劑代謝有關的藥物代謝酶進行基因分型。結果:(1)對研究人群術后三周的臨床數據進行統計分析,發(fā)現谷丙轉氨酶、谷氨酰轉移酶、總膽紅素的濃度異常,說明肝臟存在損傷。上述指標與他克莫司進行相關性分析,發(fā)現總膽紅素濃度與他克莫司血藥濃度成負相關(r=-0.300,P0.05)。(2)采用三種RT2 Profiler PCR Array檢測他克莫司血藥濃度高組與血藥濃度低組差異表達基因,通過分析共發(fā)現29個差異表達基因(差異倍數1.5,P0.05),相比于血藥濃度高組,29個差異表達基因在血藥濃度低組表達量均升高。(3)本研究篩選出的29個基因來自細胞色素P450酶系、乙醛脫氫酶系、乙醇脫氫酶系、酯酶系、前列腺素-內過氧化物合成酶系、黃嘌呤脫氫酶系、脫羧酶系、谷胱甘肽轉移酶系、N-乙酰轉移酶系、磺基轉移酶系,29個基因中12個屬于P450酶系,說明P450酶系的酶變化更明顯。(4)采用64例樣本對RT2 Profiler PCR Array結果進行驗證,得出6個有意義的基因,分別為CYP1A1、CYP3A5、CYP2B6、CYP4A11、CYP17A1、CYP19A1,6個基因都屬于P450酶系。相比于他克莫司血藥濃度高組,6個基因在血藥濃度低組表達量均升高,與RT2 Profiler PCR Array結果一致。分別將各基因表達量與他克莫司血藥濃度進行相關性分析發(fā)現CYP3A5(r=-0.381,P0.05)、CYP4A11(r=-0.331,P0.05)、CYP2B6(r=-0.339,P0.05)與他克莫司血藥濃度呈負相關。(5)三種免疫抑制劑(他克莫司、嗎替麥考酚酯、甲基強的松龍)分別與5個重組人源P450酶(CYP1A1、CYP3A5、CYP2B6、CYP4A11、CYP17A1)孵育,應用HPLC-MS法測定孵育液中免疫抑制劑的剩余量。結果證明CYP3A5參與他克莫司的代謝轉化,CYP17A1參與嗎替麥考酚酯的代謝轉化。(6)采用i MLDR技術對CYP17A1基因的6個SNP位點進行基因分型,通過統計分析發(fā)現CYP17A1的rs17115149位點的G/G基因型的表達量比G/T基因型的表達量低(P0.05)。其他幾個SNP位點不同的基因型表達量沒有統計學差異。結論:肝移植患者術后他克莫司血藥濃度與外周血中CYP1A1、CYP3A5、CYP2B6、CYP4A11、CYP17A1、CYP19A1的基因表達量相關,六個基因的表達量可以反應患者肝臟損傷情況和患者體內藥物代謝酶水平;CYP3A5是代謝他克莫司的主要酶;CYP17A1可以代謝嗎替麥考酚酯;rs17115149基因多態(tài)性可能影響CYP17A1的轉錄水平。
【關鍵詞】：肝移植 藥物代謝酶基因表達 重組酶 基因多態(tài)性 SNP分型
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R657.3
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語11-13
• 前言13-16
• 研究現狀、成果13-14
• 研究目的、方法14-16
• 一、實驗樣本采集與篩選16-20
• 1.1 實驗材料與方法16
• 1.1.1 研究對象16
• 1.1.2 臨床給藥方案16
• 1.1.3 外周血樣本的采集16
• 1.1.4 患者基本資料收集16
• 1.1.5 統計方法16
• 1.2 實驗結果16-20
• 1.2.1 術后肝移植樣本臨床資料16-17
• 1.2.2 臨床數據統計結果17-18
• 1.2.3 實驗樣本的篩選18
• 1.2.4 小結18-20
• 二、肝移植患者外周血RT2Profiler PCR Array篩查20-30
• 2.1 概述20
• 2.2 實驗材料與方法20-25
• 2.2.1 主要試劑20-21
• 2.2.2 常用液體的配制21
• 2.2.3 主要儀器21-22
• 2.2.4 實驗方法22-25
• 2.3 實驗結果25-27
• 2.3.1 熒光定量PCR擴增結果25
• 2.3.2 檢測血藥濃度高組和血藥濃度低組差異表達基因25-26
• 2.3.3 血藥濃度高組和血藥濃度低組兩組差異表達基因匯總26-27
• 2.3.4 差異表達基因的功能分析27
• 2.4 討論27-30
• 2.4.1 藥物的代謝反應27-28
• 2.4.2 差異表達基因功能分析28-29
• 2.4.3 小結29-30
• 三、64例樣本驗證RT2 Profiler PCR Array結果30-39
• 3.1 概述30
• 3.2 研究對象和方法30-32
• 3.2.1 研究對象30
• 3.2.2 實驗材料30
• 3.2.3 主要儀器30
• 3.2.4 實驗方法30-32
• 3.3 實驗結果32-33
• 3.4 討論33-37
• 3.4.1 他克莫司的免疫抑制作用33-34
• 3.4.2 藥物代謝酶的功能34-35
• 3.4.3 功能分析35-37
• 3.5 小結37-39
• 四、重組酶實驗39-50
• 4.1 實驗材料與方法39-41
• 4.1.1 實驗材料39
• 4.1.2 實驗儀器39-40
• 4.1.3 實驗方法40-41
• 4.2 實驗結果41-47
• 4.2.1 嗎替麥考酚酯與四種藥物代謝酶反應的結果41-43
• 4.2.2 他克莫司與五種藥物代謝酶反應的結果43-44
• 4.2.3 甲基強的松龍與四種藥物代謝酶反應的結果44-45
• 4.2.4 重組酶實驗發(fā)現代謝嗎替麥考酚酯的新酶45-46
• 4.2.5 分析嗎替麥考酚酯被CYP17A1代謝的產物46-47
• 4.3 討論47-49
• 4.4 小結49-50
• 五、CYP17A1基因SNP分析50-59
• 5.1 概述50
• 5.2 實驗材料與方法50-55
• 5.2.1 實驗材料50-51
• 5.2.2 儀器設備51-52
• 5.2.3 實驗方法52-55
• 5.3 實驗結果55-57
• 5.3.1 CYP17A1基因SNP分型結果55-56
• 5.3.2 CYP17A1定量結果與基因型的關系56-57
• 5.4 討論57-58
• 5.5 小結58-59
• 結論59-60
• 參考文獻60-66
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明66-67
• 綜述 常用免疫抑制劑與藥物代謝酶基因組學研究現狀67-82
• 綜述參考文獻75-82
• 致謝82-83
• 個人簡歷83

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本文編號：633791