本文關(guān)鍵詞：肝移植患者外周血中藥物代謝酶基因表達(dá)的研究

  更多相關(guān)文章： 肝移植 藥物代謝酶基因表達(dá) 重組酶 基因多態(tài)性 SNP分型

【摘要】：目的:研究肝移植患者術(shù)后外周血中藥物代謝酶基因表達(dá)情況,探究在肝移植術(shù)后將檢測藥物代謝酶基因表達(dá)量應(yīng)用于預(yù)測肝損傷,從而進(jìn)一步指導(dǎo)臨床用藥。方法:選取2013年10月~2014年4月在天津市第一中心醫(yī)院進(jìn)行肝移植的患者64例,64例患者均采用三聯(lián)免疫抑制治療方案。采集患者術(shù)后三周的外周血,對(duì)收集到的臨床數(shù)據(jù)采用非線性混合效應(yīng)模型(Nonlinear Mixed Effect Model,NONMEM)進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)他克莫司的清除率主要受總膽紅素、血紅蛋白、術(shù)后時(shí)間、血尿素氮的影響,除了上述指標(biāo)外還將白蛋白、總蛋白指標(biāo)納入研究。首先從術(shù)后三周的樣本中篩選出8例,根據(jù)他克莫司不同的血藥濃度分為兩組:血藥濃度高組和血藥濃度低組;提取外周血中RNA逆轉(zhuǎn)成c DNA,采用RT2Profiler PCR Array篩查兩組差異表達(dá)的基因;采用64例樣本驗(yàn)證RT2 Profiler PCR Array結(jié)果;采用重組人源CYP酶實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證表達(dá)發(fā)生變化的基因與免疫抑制劑的代謝關(guān)系;采用i MLDR技術(shù)對(duì)與抑制劑代謝有關(guān)的藥物代謝酶進(jìn)行基因分型。結(jié)果:(1)對(duì)研究人群術(shù)后三周的臨床數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,發(fā)現(xiàn)谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷氨酰轉(zhuǎn)移酶、總膽紅素的濃度異常,說明肝臟存在損傷。上述指標(biāo)與他克莫司進(jìn)行相關(guān)性分析,發(fā)現(xiàn)總膽紅素濃度與他克莫司血藥濃度成負(fù)相關(guān)(r=-0.300,P0.05)。(2)采用三種RT2 Profiler PCR Array檢測他克莫司血藥濃度高組與血藥濃度低組差異表達(dá)基因,通過分析共發(fā)現(xiàn)29個(gè)差異表達(dá)基因(差異倍數(shù)1.5,P0.05),相比于血藥濃度高組,29個(gè)差異表達(dá)基因在血藥濃度低組表達(dá)量均升高。(3)本研究篩選出的29個(gè)基因來自細(xì)胞色素P450酶系、乙醛脫氫酶系、乙醇脫氫酶系、酯酶系、前列腺素-內(nèi)過氧化物合成酶系、黃嘌呤脫氫酶系、脫羧酶系、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶系、N-乙酰轉(zhuǎn)移酶系、磺基轉(zhuǎn)移酶系,29個(gè)基因中12個(gè)屬于P450酶系,說明P450酶系的酶變化更明顯。(4)采用64例樣本對(duì)RT2 Profiler PCR Array結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證,得出6個(gè)有意義的基因,分別為CYP1A1、CYP3A5、CYP2B6、CYP4A11、CYP17A1、CYP19A1,6個(gè)基因都屬于P450酶系。相比于他克莫司血藥濃度高組,6個(gè)基因在血藥濃度低組表達(dá)量均升高,與RT2 Profiler PCR Array結(jié)果一致。分別將各基因表達(dá)量與他克莫司血藥濃度進(jìn)行相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)CYP3A5(r=-0.381,P0.05)、CYP4A11(r=-0.331,P0.05)、CYP2B6(r=-0.339,P0.05)與他克莫司血藥濃度呈負(fù)相關(guān)。(5)三種免疫抑制劑(他克莫司、嗎替麥考酚酯、甲基強(qiáng)的松龍)分別與5個(gè)重組人源P450酶(CYP1A1、CYP3A5、CYP2B6、CYP4A11、CYP17A1)孵育,應(yīng)用HPLC-MS法測定孵育液中免疫抑制劑的剩余量。結(jié)果證明CYP3A5參與他克莫司的代謝轉(zhuǎn)化,CYP17A1參與嗎替麥考酚酯的代謝轉(zhuǎn)化。(6)采用i MLDR技術(shù)對(duì)CYP17A1基因的6個(gè)SNP位點(diǎn)進(jìn)行基因分型,通過統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)CYP17A1的rs17115149位點(diǎn)的G/G基因型的表達(dá)量比G/T基因型的表達(dá)量低(P0.05)。其他幾個(gè)SNP位點(diǎn)不同的基因型表達(dá)量沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論:肝移植患者術(shù)后他克莫司血藥濃度與外周血中CYP1A1、CYP3A5、CYP2B6、CYP4A11、CYP17A1、CYP19A1的基因表達(dá)量相關(guān),六個(gè)基因的表達(dá)量可以反應(yīng)患者肝臟損傷情況和患者體內(nèi)藥物代謝酶水平;CYP3A5是代謝他克莫司的主要酶;CYP17A1可以代謝嗎替麥考酚酯;rs17115149基因多態(tài)性可能影響CYP17A1的轉(zhuǎn)錄水平。
【關(guān)鍵詞】：肝移植 藥物代謝酶基因表達(dá) 重組酶 基因多態(tài)性 SNP分型
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R657.3
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語11-13
• 前言13-16
• 研究現(xiàn)狀、成果13-14
• 研究目的、方法14-16
• 一、實(shí)驗(yàn)樣本采集與篩選16-20
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法16
• 1.1.1 研究對(duì)象16
• 1.1.2 臨床給藥方案16
• 1.1.3 外周血樣本的采集16
• 1.1.4 患者基本資料收集16
• 1.1.5 統(tǒng)計(jì)方法16
• 1.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果16-20
• 1.2.1 術(shù)后肝移植樣本臨床資料16-17
• 1.2.2 臨床數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果17-18
• 1.2.3 實(shí)驗(yàn)樣本的篩選18
• 1.2.4 小結(jié)18-20
• 二、肝移植患者外周血RT2Profiler PCR Array篩查20-30
• 2.1 概述20
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法20-25
• 2.2.1 主要試劑20-21
• 2.2.2 常用液體的配制21
• 2.2.3 主要儀器21-22
• 2.2.4 實(shí)驗(yàn)方法22-25
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-27
• 2.3.1 熒光定量PCR擴(kuò)增結(jié)果25
• 2.3.2 檢測血藥濃度高組和血藥濃度低組差異表達(dá)基因25-26
• 2.3.3 血藥濃度高組和血藥濃度低組兩組差異表達(dá)基因匯總26-27
• 2.3.4 差異表達(dá)基因的功能分析27
• 2.4 討論27-30
• 2.4.1 藥物的代謝反應(yīng)27-28
• 2.4.2 差異表達(dá)基因功能分析28-29
• 2.4.3 小結(jié)29-30
• 三、64例樣本驗(yàn)證RT2 Profiler PCR Array結(jié)果30-39
• 3.1 概述30
• 3.2 研究對(duì)象和方法30-32
• 3.2.1 研究對(duì)象30
• 3.2.2 實(shí)驗(yàn)材料30
• 3.2.3 主要儀器30
• 3.2.4 實(shí)驗(yàn)方法30-32
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-33
• 3.4 討論33-37
• 3.4.1 他克莫司的免疫抑制作用33-34
• 3.4.2 藥物代謝酶的功能34-35
• 3.4.3 功能分析35-37
• 3.5 小結(jié)37-39
• 四、重組酶實(shí)驗(yàn)39-50
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法39-41
• 4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料39
• 4.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器39-40
• 4.1.3 實(shí)驗(yàn)方法40-41
• 4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果41-47
• 4.2.1 嗎替麥考酚酯與四種藥物代謝酶反應(yīng)的結(jié)果41-43
• 4.2.2 他克莫司與五種藥物代謝酶反應(yīng)的結(jié)果43-44
• 4.2.3 甲基強(qiáng)的松龍與四種藥物代謝酶反應(yīng)的結(jié)果44-45
• 4.2.4 重組酶實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)代謝嗎替麥考酚酯的新酶45-46
• 4.2.5 分析嗎替麥考酚酯被CYP17A1代謝的產(chǎn)物46-47
• 4.3 討論47-49
• 4.4 小結(jié)49-50
• 五、CYP17A1基因SNP分析50-59
• 5.1 概述50
• 5.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法50-55
• 5.2.1 實(shí)驗(yàn)材料50-51
• 5.2.2 儀器設(shè)備51-52
• 5.2.3 實(shí)驗(yàn)方法52-55
• 5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果55-57
• 5.3.1 CYP17A1基因SNP分型結(jié)果55-56
• 5.3.2 CYP17A1定量結(jié)果與基因型的關(guān)系56-57
• 5.4 討論57-58
• 5.5 小結(jié)58-59
• 結(jié)論59-60
• 參考文獻(xiàn)60-66
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明66-67
• 綜述 常用免疫抑制劑與藥物代謝酶基因組學(xué)研究現(xiàn)狀67-82
• 綜述參考文獻(xiàn)75-82
• 致謝82-83
• 個(gè)人簡歷83

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本文編號(hào)：633791