本文關(guān)鍵詞：融合β-甘露聚糖酶基因的構(gòu)建、表達(dá)及酶學(xué)性質(zhì)的分析

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【摘要】：宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)YL-01-78的糖苷水解酶5家族β-甘露聚糖酶(Au Man5A)是一種僅含催化域(CM)的單結(jié)構(gòu)蛋白。為改善其酶學(xué)性質(zhì),基于理性設(shè)計(jì)將海棲熱胞菌(Thermotoga maritima)MSB8的27家族碳水化合物結(jié)合域(CBM27)融合至Au Man5A的C-端,并采用重疊PCR技術(shù)構(gòu)建融合酶基因Auman5A-cbm27。分別將Auman5A-cbm27和Auman5A在畢赤酵母GS115中進(jìn)行表達(dá),對(duì)重組表達(dá)產(chǎn)物re Au Man5A-CBM27和re Au Man5A進(jìn)行純化和酶學(xué)性質(zhì)測(cè)定。結(jié)果表明,re Au Man5A-CBM27和re Au Man5A的最適溫度均為68℃;兩者分別在68和60℃及以下穩(wěn)定。同時(shí),前者較后者具有更廣泛的p H穩(wěn)定范圍。re Au Man5ACBM27對(duì)角豆膠的Km值由融合前的1.7 mg/m L降至0.7 mg/m L,表明Au Man5A的底物親和力得到了提高。
【作者單位】： 江南大學(xué)食品學(xué)院;江南大學(xué)無(wú)錫醫(yī)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： β-甘露聚糖酶 催化域 碳水化合物結(jié)合域 熱穩(wěn)定性 底物親和力
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31271811)
【分類(lèi)號(hào)】：Q55;Q78
【正文快照】： Analysis of a Fusionβ-Mannanaseβ-甘露聚糖酶是內(nèi)切β-1,4-D-甘露聚糖酶(endo-β-1,4-D-mannanase,EC 3.2.1.78)的簡(jiǎn)稱(chēng),根據(jù)其一級(jí)結(jié)構(gòu)和疏水簇分析,幾乎所有β-甘露聚糖酶可歸為糖苷水解酶5、26和113家族(http://www.cazy.org/fam/acc_GH.html)[1]。β-甘露聚糖酶廣泛存

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