本文關(guān)鍵詞：花絨寄甲methuselah-like基因的克隆和表達(dá)研究

  更多相關(guān)文章： 花絨寄甲 mth-like基因 RACE-PCR擴(kuò)增 RT-qPCR定量表達(dá)

【摘要】：花絨寄甲Dastarcus helophoroides(Fairmaire)隸屬于鞘翅目Coleoptera穴甲科Bothrideridae,是天牛類、吉丁類和象甲類等蛀干害蟲(chóng)的有效天敵昆蟲(chóng);與其他昆蟲(chóng)相比,花絨寄甲成蟲(chóng)擁有較長(zhǎng)的壽命,在實(shí)驗(yàn)室人工飼養(yǎng)條件下可存活8年以上。methuselah(mth)是一類重要的受體基因,與昆蟲(chóng)的壽命、生殖能力和抗逆能力相關(guān),但僅存在于果蠅Drosophila;隨后發(fā)現(xiàn)的大量mth同源基因mth-like廣泛存在于各類昆蟲(chóng),但到目前為止在花絨寄甲中還未見(jiàn)報(bào)道。本研究在對(duì)mth-like進(jìn)行檢索的基礎(chǔ)上,采用RACE-PCR技術(shù)進(jìn)行全長(zhǎng)擴(kuò)增,運(yùn)用多種生物信息學(xué)工具對(duì)其進(jìn)行分析,并采用RT-qPCR技術(shù)對(duì)其在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)情況進(jìn)行解析。主要結(jié)果如下:1.在對(duì)轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索,獲得6條相應(yīng)mth-like序列片段的基礎(chǔ)上,對(duì)序列進(jìn)行3’和5’RACE擴(kuò)增,最后得到6條mth-like全長(zhǎng)序列。將序列分別命名為mth-like1、mth-like2-1、mth-like2-2、mth-like2-3、mth-like5-1和mth-like5-2,將對(duì)應(yīng)的氨基酸序列分別命名為Mth-like1、Mth-like2-1、Mth-like2-2、Mth-like2-3、Mth-like5-1和Mth-like5-2。2.在線預(yù)測(cè)和多序列比對(duì)結(jié)果表明6條序列均具有保守的七次跨膜結(jié)構(gòu);系統(tǒng)進(jìn)化分析表明,Mth-like1、Mth-like2-1、Mth-like2-2、Mth-like5-1和Mth-like5-2都與赤擬谷盜的進(jìn)化關(guān)系最近,Mth-like2-3則與膜翅目昆蟲(chóng)最近。3.RT-qPCR分析表明,6條基因在各發(fā)育階段和不同組織均有表達(dá),但表達(dá)圖譜呈現(xiàn)出較大差異性。6條基因的表達(dá)量在成蟲(chóng)衰老的過(guò)程中均呈規(guī)律性變化,除mth-like2-1后期(20-30個(gè)月)表達(dá)量顯著低于正常水平外,其余基因的表達(dá)量要么恢復(fù)到了正常水平(mth-like2-2),要么升高到較高水平(mth-like1、mth-like2-3、mth-like5-1和mth-like5-2)。mth-like1、mth-like2-1、mth-like2-2、和mth-like2-3對(duì)氧化脅迫均有響應(yīng),并表現(xiàn)出時(shí)間效應(yīng),推測(cè)這些基因可能與花絨寄甲的抗氧化能力有關(guān);mth-like2-1、mth-like2-2和mth-like2-3對(duì)高溫脅迫有響應(yīng),推測(cè)這些基因可能與花絨寄甲的抗高溫能力相關(guān);在饑餓脅迫下,6條基因的表達(dá)量均呈規(guī)律性變化,推測(cè)這些基因可能都與成蟲(chóng)的抗饑餓能力相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：花絨寄甲 mth-like基因 RACE-PCR擴(kuò)增 RT-qPCR定量表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S763.306.4
【目錄】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-12
• 第一章 文獻(xiàn)綜述12-19
• 1.1 花絨寄甲簡(jiǎn)介12-14
• 1.1.1 花絨寄甲生物學(xué)習(xí)性12
• 1.1.2 花絨寄甲人工繁育12-13
• 1.1.3 花絨寄甲對(duì)天牛的防治效果13
• 1.1.4 花絨寄甲衰老機(jī)制13-14
• 1.2 Mth/Mth-like受體家族14-17
• 1.2.1 mth/mth-like基因的發(fā)現(xiàn)14
• 1.2.2 Mth/Mth-like受體的結(jié)構(gòu)14-15
• 1.2.3 Mth/Mth-like受體的配體和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路15-16
• 1.2.4 Mth/Mth-like受體的分布和生理功能16-17
• 1.3 研究?jī)?nèi)容和目的意義17-18
• 1.3.1 研究?jī)?nèi)容17
• 1.3.2 研究的目的意義17-18
• 1.4 技術(shù)路線18-19
• 第二章 花絨寄甲mth-like基因的檢索和克隆19-26
• 2.1 材料和方法19-23
• 2.1.1 供試蟲(chóng)源19
• 2.1.2 主要試劑與儀器19
• 2.1.3 花絨寄甲mth-like基因的檢索19-20
• 2.1.4 花絨寄甲成蟲(chóng)總RNA提取和質(zhì)量檢測(cè)20-21
• 2.1.5 花絨寄甲mth-like基因片段的全長(zhǎng)擴(kuò)增21-23
• 2.2 結(jié)果與分析23-24
• 2.2.1 花絨寄甲mth-like基因的檢索結(jié)果23-24
• 2.2.2 花絨寄甲mth-like基因片段的擴(kuò)增結(jié)果24
• 2.3 小結(jié)24-25
• 2.4 討論25-26
• 第三章 花絨寄甲mth-like基因的生物信息學(xué)分析26-32
• 3.1 分析方法26
• 3.1.1 序列特征分析26
• 3.1.2 系統(tǒng)進(jìn)化分析26
• 3.2 分析結(jié)果26-30
• 3.2.1 氨基酸序列特征分析26-28
• 3.2.2 系統(tǒng)發(fā)育分析28-30
• 3.3 小結(jié)30-31
• 3.4 討論31-32
• 第四章 花絨寄甲mth-like基因的表達(dá)模式分析32-48
• 4.1 材料和方法32-36
• 4.1.1 供試蟲(chóng)源32
• 4.1.2 主要試劑與儀器32
• 4.1.3 不同發(fā)育階段花絨寄甲的收集32
• 4.1.4 花絨寄甲成蟲(chóng)的解剖與組織的收集32-33
• 4.1.5 不同存活時(shí)間花絨寄甲成蟲(chóng)的收集33
• 4.1.6 氧化脅迫處理33
• 4.1.7 高溫脅迫處理33
• 4.1.8 饑餓脅迫處理33-34
• 4.1.9 總RNA的提取和第一鏈c DNA的合成34
• 4.1.10 內(nèi)參基因的選擇和引物設(shè)計(jì)34-35
• 4.1.11 引物熔解曲線和擴(kuò)增效率分析35
• 4.1.12 定量PCR（RT-q PCR）35
• 4.1.13 數(shù)據(jù)分析35-36
• 4.2 結(jié)果與分析36-44
• 4.2.1 擴(kuò)增產(chǎn)物熔解曲線和引物擴(kuò)增效率36
• 4.2.2 花絨寄甲不同發(fā)育階段mth-like基因的表達(dá)36-38
• 4.2.3 花絨寄甲成蟲(chóng)不同組織mth-like基因的表達(dá)38-39
• 4.2.4 不同存活時(shí)間花絨寄甲成蟲(chóng)mth-like基因的表達(dá)39-40
• 4.2.5 氧化脅迫下花絨寄甲成蟲(chóng)mth-like基因的表達(dá)40-42
• 4.2.6 高溫脅迫下花絨寄甲成蟲(chóng)mth-like基因的表達(dá)42-44
• 4.2.7 饑餓脅迫下花絨寄甲成蟲(chóng)mth-like基因的表達(dá)44
• 4.3 小結(jié)44-46
• 4.4 討論46-48
• 第5章 主要結(jié)論、創(chuàng)新點(diǎn)和研究展望48-50
• 5.1 主要結(jié)論48-49
• 5.1.1 克隆獲得6條mth-like全長(zhǎng)序列48
• 5.1.2 解析了mth-like基因在不同蟲(chóng)態(tài)的表達(dá)模式48
• 5.1.3 解析了mth-like基因的組織分布模式48-49
• 5.1.4 明確了mth-like基因表達(dá)隨成蟲(chóng)衰老的變化模式49
• 5.1.5 明確了mth-like基因表達(dá)對(duì)不同脅迫的響應(yīng)模式49
• 5.2 創(chuàng)新點(diǎn)49
• 5.3 研究展望49-50
• 參考文獻(xiàn)50-55
• 致謝55-56
• 作者簡(jiǎn)介56

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：615988