發(fā)布時間：2017-08-02 18:17

  本文關鍵詞：RNA干擾Bloom解旋酶基因表達對人前列腺癌PC3細胞生物學特性的影響

  更多相關文章： Bloom解旋酶 RNAi 人前列腺癌PC3細胞 增殖 遷移 侵襲 凋亡

【摘要】：RecQ解旋酶家族是DNA解旋酶家族中高度保守的家族,在DNA復制、重組、修復、轉錄等細胞代謝和穩(wěn)定遺傳中起到至關重要的作用。Bloom解旋酶是RecQ家族中的一個重要的組成成員,它參與了DNA的復制、重組等細胞代謝過程,在維持端粒和染色體的穩(wěn)定性中也發(fā)揮著重要作用,并且其能夠與多種蛋白因子發(fā)生相互作用,影響與之作用的因子的功能。Bloom解旋酶基因的突變可導致Bloom綜合征的發(fā)生,Bloom綜合征是一種罕見隱性常染色體遺傳疾病,患者不僅遺傳不穩(wěn)定,并且易患多種類型癌癥。在DNA修復和細胞凋亡過程中,涉及到對DNA損壞和使復制叉停止的細胞應答。對DNA修復因子-BLM解旋酶的特異性抑制作用可能緩解癌細胞的高增殖率,暗示這種酶可能作為抗癌藥物作用的分子靶標。本論文構建了Bloom解旋酶基因的RNA干擾載體,研究了其載體對人類前列腺癌PC3細胞生物學特性的影響,這可能為人類前列腺癌的靶向基因治療提供新思路,相關研究結果如下:1.構建了Bloom解旋酶基因的RNAi載體,經(jīng)轉化大腸桿菌感受態(tài)細胞克隆該載體,瓊脂糖凝膠電泳和DNA測序證實了構建載體正確2.將構建的載體通過脂質(zhì)體法轉染進人前列腺癌PC3細胞中,轉染一定時間后,提取細胞總RNA,反轉錄成cDNA,提取細胞總蛋白。用cDNA做模板進行熒光定量PCR實驗,用定量后的總蛋白做模板進行蛋白質(zhì)印跡(western-blot)實驗。從基因和蛋白水平證明了該載體能夠有效抑制Bloom解旋酶的表達。3.MTT、劃痕實驗、transwell小室實驗檢測、Hoechst/PI雙染實驗證明分別證明了Bloom解旋酶的表達被抑制后,人類前列腺癌PC3細胞的增殖、遷移、侵襲能力均受到抑制,而PC3細胞的凋亡能力加強。
【關鍵詞】：Bloom解旋酶 RNAi 人前列腺癌PC3細胞 增殖 遷移 侵襲 凋亡
【學位授予單位】：貴州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.25
【目錄】：

• 縮略詞表5-7
• 摘要7-8
• Abstract8-10
• 第一章 前言10-22
• 1.DNA解旋酶概述10-14
• 1.1 DNA解旋酶的分類10-11
• 1.2 DNA解旋酶的生化活性及功能11-14
• 1.2.1 核酸結合活性11-12
• 1.2.2 NTP結合與水解活性12
• 1.2.3 解鏈活性12-13
• 1.2.4 退火活性13
• 1.2.5 DNA解旋酶的功能13-14
• 2.RecQ解旋酶結構與生物學特性14
• 3.Bloom解旋酶的研究進展14-16
• 3.1 Bloom解旋酶的功能15
• 3.2 與Bloom解旋酶相關的疾病研究15-16
• 4.人類前列腺癌的發(fā)生與Bloom解旋酶作為抗癌靶標的研究16-18
• 5.RNA干擾技術的應用18-20
• 6.本課題的選題目的及研究意義20-22
• 第二章 Bloom解旋酶基因RNAi載體的構建22-27
• 1.試劑與設備22-23
• 1.1 實驗試劑22-23
• 1.2 實驗設備23
• 2.實驗方法23-25
• 2.1 RNAi載體的設計合成23-24
• 2.2 感受態(tài)細胞的制備24-25
• 2.3 干擾載體的克隆轉化25
• 3.實驗結果25
• 4.討論25-27
• 第三章 Bloom解旋酶基因RNAi載體的鑒定27-46
• 1.干擾載體的初步鑒定27-30
• 1.1 實驗試劑27
• 1.2 實驗方法27-28
• 1.3 實驗結果28-30
• 2. 熒光定量PCR檢測干擾載體對Bloom解旋酶基因表達的影響30-41
• 2.1 試劑與設備30-31
• 2.1.1 實驗試劑30-31
• 2.1.2 實驗設備31
• 2.2 實驗方法31-36
• 2.2.1 PC3細胞的培養(yǎng)31-32
• 2.2.2 無內(nèi)毒素質(zhì)粒的提取32-33
• 2.2.3 重組載體轉染PC3細胞33
• 2.2.4 轉染重組載體后PC3細胞總RNA的提取與RNA的反轉錄33-34
• 2.2.5 轉染后細胞c DNA的熒光定量PCR反應34-36
• 2.3 實驗結果36-41
• 3. 蛋白質(zhì)印跡技術檢測干擾載體對Bloom解旋酶蛋白表達的影響41-44
• 3.1 試劑與設備41
• 3.1.1 實驗試劑41
• 3.1.2 實驗設備41
• 3.2 實驗方法41-44
• 3.2.1 PC3細胞的培養(yǎng)41
• 3.2.2 重組載體轉染PC3細胞41
• 3.2.3 轉染后細胞總蛋白的提取及總蛋白的定量41-43
• 3.2.4 定量后總蛋白的Western-blot反應43-44
• 3.3 實驗結果44
• 4.討論44-46
• 第四章 下調(diào)Bloom解旋酶的表達對PC3細胞的抑制作用46-58
• 1.試劑與設備46-47
• 1.1 實驗試劑46-47
• 1.2 實驗設備47
• 2.實驗方法47-49
• 2.1 PC3細胞的培養(yǎng)47
• 2.2 重組載體轉染PC3細胞47
• 2.3 PC3細胞增殖能力的檢測47
• 2.4 PC3細胞侵襲能力的檢測47-48
• 2.5 PC3細胞遷移能力的檢測48
• 2.6 PC3細胞凋亡能力的檢測48-49
• 3.實驗結果49-56
• 3.1 PC3細胞增殖能力的變化49-50
• 3.2 PC3細胞侵襲能力的變化50-51
• 3.3 PC3細胞遷移能力的變化51-54
• 3.4 PC3細胞凋亡能力的變化54-56
• 4.討論56-58
• 第五章 結論58-59
• 參考文獻59-71
• 致謝71-73
• 附錄73-74

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本文編號：610617