本文關(guān)鍵詞：干擾基因BMI-1表達(dá)對食管癌細(xì)胞放射敏感性的影響

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【摘要】：背景與目的:B細(xì)胞特異性的莫洛尼白血病毒插入位點1(B-cell-specific Moloney leukemia virus insertion site 1,BMI-1)期在放療后DNA損傷中發(fā)揮重要作用。該研究采用siRNA干擾技術(shù)降低食管癌TE13細(xì)胞中BMI-1基因表達(dá),探討B(tài)MI-1的表達(dá)對X射線照射后食管癌細(xì)胞放射敏感性的影響。方法:針對BMI-1 mRNA序列,3對有效的干擾序列(siRNA1、siRNA2和siRNA3)和陰性對照序列由公司設(shè)計合成,瞬時轉(zhuǎn)染食管癌TE13細(xì)胞,命名為BMI-1 siRNA1、BMI-1 siRNA2和BMI-1 siRNA3共3組,轉(zhuǎn)染陰性對照序列組命名為NC組,未轉(zhuǎn)染組命名為對照組。采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)和蛋白[質(zhì)]印跡法(Western blot)檢測TE13各組中BMI-1在mRNA和蛋白水平的表達(dá)。采用MTT法檢測BMI-1基因轉(zhuǎn)染對TE13細(xì)胞增殖能力的影響。克隆形成實驗檢測BMI-1對TE13放射敏感性的作用。流式細(xì)胞術(shù)測定siRNA干擾BMI-1基因?qū)?xì)胞周期和凋亡分布的影響。RT-PCR和Western blot檢測細(xì)胞內(nèi)p16、CDK4基因和蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:3對干擾序列使人BMI-1基因在mRNA和蛋白表達(dá)水平低于對照組和NC組,尤以siRNA3組效果最明顯。選擇siRNA3作為干擾組進(jìn)行MTT和流式細(xì)胞術(shù)。MTT結(jié)果表明,BMI-1 siRNA3轉(zhuǎn)染后BMI-1的低表達(dá)對細(xì)胞的增殖能力無明顯影響;克隆形成實驗的結(jié)果顯示,空白對照組、NC組、干擾組的D_0分別為2.514、2.506和1.761 Gy;D_q值分別為2.694、2.664和2.122 Gy;外推數(shù)N值分別為2.920、2.895和3.336;SF2值分別為0.826 8、0.823 1和0.625 5,可見對照組和空載組間放射敏感性差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),而干擾組細(xì)胞的放射敏感性高于對照組和NC組;流式細(xì)胞術(shù)分析顯示,6 Gy照射后,BMI-1 siRNA組G_0/G_1期比例明顯高于對照組和空載組,G_2/M期顯著低于對照組和NC組,而未照射時BMI-1的低表達(dá)對細(xì)胞周期無明顯影響。干擾BMI-1基因后TE13細(xì)胞p16基因和蛋白水平升高(P0.01),CDK4基因和蛋白表達(dá)水平顯著降低(P0.01)。結(jié)論:siRNA干擾技術(shù)有效地抑制了食管癌細(xì)胞TE13中BMI-1基因的表達(dá),聯(lián)合X線照射后顯著消除了細(xì)胞周期在G_2/M期的阻滯,增加了食管癌的放射敏感性,其誘導(dǎo)作用與p16和CDK4基因和蛋白表達(dá)有關(guān)。
【作者單位】： 河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院感染管理科;河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院放療三科;河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院檢驗科;
【關(guān)鍵詞】： BMI-基因 RNA干擾 X射線照射 放射敏感性 p基因 CDK基因
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(81372416) 河北省中醫(yī)藥管理局資助項目(2015131) 河北省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所資助項目(20160183)
【分類號】：R735.1
【正文快照】： ny,and transfected into cultured TE13 cells as the BMI-1 si RNA groups,and a negative one was synthesized to be usedas the negative control(NC)group.The untransfected group was named as the control group.BMI-1 m RNA and proteinexpression in esophageal ca

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本文編號：610278