發(fā)布時間：2017-07-17 08:35

  本文關(guān)鍵詞：熒光PCR和數(shù)字PCR法檢測轉(zhuǎn)基因DAS-44406-6品系大豆

  更多相關(guān)文章： 轉(zhuǎn)基因大豆 DAS--品系 品系鑒定 實(shí)時熒光PCR 數(shù)字PCR

【摘要】：目的:建立實(shí)時熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)檢測轉(zhuǎn)基因DAS-44406-6品系大豆的定性檢測方法和使用數(shù)字PCR檢測轉(zhuǎn)基因DAS-44406-6品系大豆的定量檢測方法。方法:針對轉(zhuǎn)基因DAS-44406-6大豆品系,進(jìn)行5’-RACE,測定該品系轉(zhuǎn)基因大豆外源片段與大豆染色體重組的邊界序列,并根據(jù)該邊界序列設(shè)計(jì)引物和探針。使用23種非DAS-44406-6品系轉(zhuǎn)基因植物作為陰性對照測試實(shí)時熒光PCR引物和探針的特異性,以DAS-44406-6品系樣品制備6個含量梯度的樣品進(jìn)行檢測低限實(shí)驗(yàn)。使用數(shù)字PCR技術(shù)進(jìn)行定量檢測,并確定定量檢測的低限。結(jié)果:建立的轉(zhuǎn)基因DAS-44406-6大豆品系的實(shí)時熒光PCR特異性檢測方法品系鑒定特異性較強(qiáng),實(shí)時熒光PCR檢測方法的檢測低限在模板DNA濃度為100 ng/反應(yīng)時,為0.01%的轉(zhuǎn)基因大豆含量,約為16.6個拷貝的DAS-44406-6基因組DNA;數(shù)字PCR檢測方法的檢測低限在模板DNA濃度為0.5 ng/反應(yīng)、轉(zhuǎn)基因大豆含量為1%時,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.7%。因此,建立的轉(zhuǎn)基因DAS-44406-6大豆品系實(shí)時熒光PCR和數(shù)字PCR特異性檢測方法符合轉(zhuǎn)基因檢測的要求。
【作者單位】： 青島大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;山東出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心;
【關(guān)鍵詞】： 轉(zhuǎn)基因大豆 DAS--品系 品系鑒定 實(shí)時熒光PCR 數(shù)字PCR
【基金】：公益性行業(yè)(質(zhì)檢)科研專項(xiàng)(201410014)
【分類號】：S565.1
【正文快照】： 引文格式:于曉帆,高宏偉,孫敏,等.熒光PCR和數(shù)字PCR法檢測轉(zhuǎn)基因DAS-44406-6品系大豆[J].食品科學(xué),2016,37(16):235-241.DOI:10.7506/spkx1002-6630-201616038.http://www.spkx.net.cnYU Xiaofan,GAO Hongwei,SUN Min,et al.Detection of genetically modified soybean event

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本文編號：552784