本文關(guān)鍵詞：水牛ghrelin基因原核表達(dá)載體構(gòu)建與蛋白表達(dá)

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【摘要】：為了研究水牛ghrelin基因的結(jié)構(gòu)與功能,本試驗(yàn)對水牛ghrelin基因進(jìn)行原核表達(dá)載體構(gòu)建與融合蛋白表達(dá)條件的優(yōu)化。采用RT-PCR方法從水牛胃組織的總RNA中擴(kuò)增出ghrelin編碼區(qū),連接到pRSET-a載體中,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),挑取陽性克隆子,用IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)條件的優(yōu)化。結(jié)果表明,成功構(gòu)建原核表達(dá)載體pRSET-a-ghrelin,在2 mmol/L IPTG,37℃的條件下誘導(dǎo)表達(dá)4 h,水牛ghrelin重組蛋白可成功獲得表達(dá),經(jīng)SDS-PAGE鑒定發(fā)現(xiàn),ghrelin融合蛋白主要以包涵體形式存在,分子量約為20 ku,其表達(dá)量占總菌體蛋白量的35%。本試驗(yàn)結(jié)果為進(jìn)一步研究水牛ghrelin基因的結(jié)構(gòu)和功能提供有價(jià)值的生物學(xué)信息。
【作者單位】： 廣西中醫(yī)藥大學(xué);廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： Ghrelin 水牛 基因克隆 原核表達(dá)
【基金】：廣西自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(2014GXNSFBA118140) 廣西大學(xué)科研基金資助項(xiàng)目(XBZ130294)
【分類號】：S823.83
【正文快照】： ghrelin是一個(gè)由28個(gè)氨基酸殘基組成的內(nèi)源性肽類激素,主要由胃組織分泌,與生長激素促分泌素受體(growth hormone secretagogue receptor,GHS-R)結(jié)合發(fā)揮促進(jìn)生長激素(growth hormone,GH)分泌的作用[1]。人、嚙齒類動(dòng)物和豬ghrelin結(jié)構(gòu)高度保守[2-3],ghrelin的第三位絲氨酸N-

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