本文關(guān)鍵詞：一個(gè)蛇苔氧甲基轉(zhuǎn)移酶基因的克隆與功能鑒定

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【摘要】：目的克隆蛇苔氧甲基轉(zhuǎn)移酶(CcOMT1)基因并對(duì)其進(jìn)行功能鑒定。方法通過(guò)RT-PCR技術(shù)獲得CcOMT1基因的c DNA全長(zhǎng)。構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒p ET32a-CcOMT1,在大腸桿菌BL21(DE3)中表達(dá)后,利用Ni-NTA吸附柱對(duì)表達(dá)的重組蛋白進(jìn)行純化,并通過(guò)體外酶活分析其活性。采用DNAMAN 7.0和MEGA 5.1軟件分別進(jìn)行氨基酸多序列比對(duì)和進(jìn)化關(guān)系分析。結(jié)果克隆得到的CcOMT1開(kāi)放讀碼框?yàn)?37 bp,編碼278個(gè)氨基酸,預(yù)測(cè)分子量為30.95 k Da,等電點(diǎn)為5.59。與來(lái)自鈍鱗紫背苔、紫花苜蓿和冰葉日中花的氧甲基轉(zhuǎn)移酶的同源性分別為73.18%、53.60%和44.60%。對(duì)純化的重組蛋白進(jìn)行酶活檢測(cè),結(jié)果表明融合蛋白可以催化具有鄰二酚羥基的黃酮和苯丙類(lèi)化合物,產(chǎn)生相應(yīng)的氧甲基化產(chǎn)物,其最適底物為槲皮素。結(jié)論克隆并鑒定了一個(gè)CcOMT1基因,為通過(guò)酶法實(shí)現(xiàn)化合物的氧甲基化修飾提供了一個(gè)候選基因。
【作者單位】： 山東大學(xué)藥學(xué)院天然產(chǎn)物化學(xué)生物學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 蛇苔 氧甲基轉(zhuǎn)移酶 黃酮 基因克隆 酶活分析
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31370330)
【分類(lèi)號(hào)】：Q943.2
【正文快照】： 網(wǎng)絡(luò)出版地址:http://www.cnki.net/kcms/detail/37.1390.R.20161114.1510.002.html苔蘚植物資源豐富,分布廣泛,是最早的陸生植物[1]。為適應(yīng)陸地環(huán)境,苔蘚植物體內(nèi)產(chǎn)生了極為豐富的次級(jí)代謝產(chǎn)物,包括聯(lián)芐類(lèi)[2]、木脂素[3]、香豆素[4]、黃酮類(lèi)[5]化合物等。這些次級(jí)代謝產(chǎn)物具

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