發(fā)布時(shí)間：2017-07-01 03:14

  本文關(guān)鍵詞：大鼠C-sis基因克隆及其真核表達(dá)載體的構(gòu)建，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景:原癌基因C-sis具有促進(jìn)細(xì)胞增殖并抑制凋亡,進(jìn)而促進(jìn)組織修復(fù)的功能。假設(shè)C-sis可能在受損肝組織的修復(fù)和暴發(fā)性肝衰竭的治療中發(fā)揮積極作用。目的:構(gòu)建pc DNA3.1/C-sis真核表達(dá)載體,檢測(cè)其在大鼠正常肝細(xì)胞株BRL細(xì)胞和在體大鼠肝臟細(xì)胞中的表達(dá)。方法:通過RT-PCR的方法克隆C-sis基因的選全長編碼序列,構(gòu)建pc DNA3.1/C-sis真核表達(dá)載體。鑒定無誤后經(jīng)脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染到BRL細(xì)胞中,并通過將質(zhì)粒注入尾靜脈后導(dǎo)入大鼠肝臟。最后通過熒光定量PCR和Western Blot鑒定其在BRL細(xì)胞和在體大鼠肝臟細(xì)胞中的表達(dá)。結(jié)果與結(jié)論:(1)成功克隆了C-sis基因全長編碼區(qū);測(cè)序證明pcD NA3.1/C-sis重組真核表達(dá)載體構(gòu)建成功;(2)將其轉(zhuǎn)染至BRL細(xì)胞和在體大鼠肝臟,可使C-sis表達(dá)升高;(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果為后續(xù)研究C-sis基因?qū)Υ笫蟊┌l(fā)性肝衰竭的影響提供了先決條件。
【作者單位】： 南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院心電診斷室;南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院消化內(nèi)科;
【關(guān)鍵詞】： 動(dòng)物 模型 基因 脂質(zhì)體 轉(zhuǎn)染 組織工程 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 基因病毒載體相關(guān)因子模型 基因克隆 C-sis 大鼠 真核表達(dá)載體 酶切 鼠尾靜脈 國家自然科學(xué)基金
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81300348) 江西省青年科學(xué)基金資助項(xiàng)目(20151BAB215006);江西省青年科學(xué)基金資助項(xiàng)目(20132BAB215015)~~
【分類號(hào)】：R575.3
【正文快照】： 文章快速閱讀:構(gòu)建重組質(zhì)粒pcD NA3.1/C-sis并檢驗(yàn)其在大鼠肝細(xì)胞中的表達(dá)通過RT-PCR的方法克隆實(shí)驗(yàn)結(jié)果:C-sis基因的選全長編碼序列。成功克隆C-sis基因全長編碼區(qū);鑒定證明pc DNA3.1/C-sis重組質(zhì)粒經(jīng)脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)通過熒光定量真核表達(dá)載體構(gòu)建成功;將其轉(zhuǎn)構(gòu)建pc DNA3.1/C-si

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