本文關鍵詞：灰葡萄孢菌核形成相關基因功能的初步研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：灰霉病在果蔬生產和儲運過程中危害嚴重。灰葡萄孢(Botrytis cinerea)是引起植物灰霉病的主要病原菌,其寄主范圍十分廣泛,可侵染200多種植物(如葡萄,番茄,草莓和黃瓜等)�；移咸焰叩木丝傻钟焕纳姝h(huán)境,在灰霉病的病害循環(huán)中起重要作用。篩選灰葡萄孢菌核形成過程中的差異表達基因,并研究其在菌核形成過程中的功能,有助于探索控制灰葡萄孢菌核形成的防治措施,對生產實踐中防治灰霉病具有重要意義。本研究從以下幾個方面對灰葡萄孢菌核形成相關基因進行了初步研究。1.從灰葡萄孢菌絲生長及菌核形成階段的RNA-Seq測序數(shù)據(jù)中,篩選出在菌核形成過程中表達量顯著上調的基因BC1G_10330、BC1G_02018和BC1G_06890,并通過熒光定量PCR證實了這3個基因的表達量在菌核形成過程中顯著上調。2.利用分割標記法和同源重組原理,采用PEG介導的原生質體轉化方法,對灰葡萄孢菌株B05.10的BC1G_10330、BC1G_02018和BC1G_06890基因進行了敲除,并對得到的敲除轉化子進行單孢分離純化,獲得了純合的目標基因敲除轉化子。3.比較了各個基因的敲除轉化子與原始菌株B05.10在菌核形成、生長速度、菌落形態(tài)、產孢量和致病力等方面的差異,為進一步明確這些基因在灰葡萄孢中的功能奠定了基礎。
【關鍵詞】：灰葡萄孢 菌核形成 致病 醛酮還原酶
【學位授予單位】：華中農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S432.4
【目錄】：

• 摘要7-8
• ABSTRACT8-9
• 縮略詞表9-10
• 第一章 前言10-16
• 1. 灰葡萄孢研究進展10-15
• 1.1 灰葡萄孢的分布和危害10
• 1.2 灰葡萄孢的分類地位及生物學特性10-11
• 1.3 灰霉病的病害循環(huán)11
• 1.4 灰葡萄孢的致病因子11-12
• 1.5 灰葡萄孢菌核形成相關因素12-13
• 1.6 灰霉病的防治13-14
• 1.7 灰葡萄孢遺傳轉化研究進展14-15
• 2. 研究目的與意義15-16
• 第二章 灰葡萄孢中基因敲除轉化子的獲得與驗證16-33
• 1. 試驗材料16-18
• 1.1 菌株16
• 1.2 培養(yǎng)基16-17
• 1.3 載體17
• 1.4 實驗試劑17-18
• 1.5 試驗儀器18
• 2. 實驗方法18-26
• 2.1 基因的獲得18
• 2.2 基因相對表達量測定18-21
• 2.2.1 總RNA提取18-19
• 2.2.2 cDNA合成19-20
• 2.2.3 qRT-PCR檢測基因的相對表達量表達20-21
• 2.3 基因敲除21-26
• 2.3.1 同源重組原理21
• 2.3.2 基因組DNA的提取21-22
• 2.3.3 轉化用片段的擴增22-24
• 2.3.4 PEG介導的原生質體轉化24-26
• 2.4 灰葡萄孢基因敲除轉化子的驗證26
• 2.4.1 基因敲除轉化子的PCR驗證26
• 3. 試驗結果與分析26-33
• 3.1 灰葡萄孢中BC1G_10330、BC1G_02018和BC1G_06890基因的序列分析26-27
• 3.2 基因表達差異驗證27-28
• 3.3 基因敲除轉化子的獲得與驗證28-31
• 3.3.1 灰葡萄孢基因BC1G_10330的敲除與驗證28-29
• 3.3.2 灰葡萄孢基因BC1G_02018的敲除與驗證29-30
• 3.3.3 灰葡萄孢基因BC1G_06890的敲除與驗證30-31
• 3.4 小結與討論31-33
• 第三章 灰葡萄孢基因BC1G_10330、BC1G_02018和BC1G_06890的基因功能初步研究33-44
• 1. 實驗材料33
• 1.1 試驗菌株33
• 1.2 培養(yǎng)基33
• 2. 試驗方法33-35
• 2.1 菌絲生長速度測定33
• 2.2 轉化子菌絲尖端形態(tài)33-34
• 2.3 轉化子產孢量測定34
• 2.4 轉化子菌落形態(tài)觀察34
• 2.5 轉化子產酸能力測定34
• 2.6 轉化子致病力測定34-35
• 2.7 轉化子菌核形成過程及菌核分布形態(tài)情況35
• 2.8 轉化子菌核生物學性狀研究35
• 3. 試驗結果35-42
• 3.1 轉化子的菌絲生長速度35-36
• 3.2 轉化子菌絲尖端形態(tài)36
• 3.3 轉化子產孢量測定36-37
• 3.4 轉化子菌落形態(tài)觀察37-38
• 3.5 轉化子產酸能力測定38
• 3.6 轉化子的致病力測定38-40
• 3.7 轉化子菌核形成過程及菌核產生情況40-42
• 4. 小結與討論42-44
• 第四章 總結與展望44-46
• 參考文獻46-51
• 致謝51

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 高智謀;李艷梅;李喜玲;章戰(zhàn)華;營金鳳;;源自不同寄主的灰葡萄孢生物學特性的比較研究[J];菌物學報;2009年03期

2 鄭超;劉學敏;張箭;;溫室番茄灰霉病流行動態(tài)預測[J];東北農業(yè)大學學報;2007年02期

3 王惠,董金皋,商鴻生;灰葡萄孢毒素的生物活性測定和除草活性成分分離研究[J];中國農業(yè)科學;2004年02期

4 李保聚,朱國仁,趙奎華,喬勇;番茄灰霉病在果實上的侵染部位及防治新技術[J];植物病理學報;1999年01期

5 朱建蘭;番茄灰霉病菌的生物學特性研究[J];甘肅農業(yè)大學學報;1995年01期

  本文關鍵詞：灰葡萄孢菌核形成相關基因功能的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：486976